線粒體DNA(mtDNA)D-Loop區(qū)突變與P53常見突變位點(diǎn)的相互作用關(guān)系及其對(duì)大腸癌化療敏感性的影響.pdf

1、目的：大腸癌是嚴(yán)重威脅我國(guó)人民健康的惡性腫瘤之一。相關(guān)研究表明，線粒體作為主要的供能細(xì)胞器在大腸癌中存在普遍的突變，且線粒體突變多集中于（mtDNA）D-Loop與p53突變存在關(guān)系。而大腸癌的常見p53突變位點(diǎn)為175、248、273三個(gè)位點(diǎn)，因此，本研究基于此進(jìn)一步的探究線粒體（mtDNA）D-Loop突變與大腸癌中p53常見突變位點(diǎn)的相關(guān)性以及對(duì)大腸癌化療敏感性的影響。
　　方法：
　　第一部分實(shí)驗(yàn)：收集大腸癌病人的臨

2、床標(biāo)本，分為癌組織及癌旁組織，提取相應(yīng)組織的總DNA，分別擴(kuò)增線粒體DNA的D-loop區(qū)以及結(jié)腸癌中P53基因的常見突變位點(diǎn)175、248、273位點(diǎn)的相關(guān)片段，測(cè)序分析 p53基因突變與 D-loop區(qū)突變相互關(guān)系。
　　第二部分實(shí)驗(yàn)：利用H2O2和p53腺病毒處理Hct116-/-細(xì)胞系。RealtimPCR分別檢測(cè)各組中核基因非同源序列COII區(qū)的水平，TA克隆的方式檢測(cè)各組的線粒體D-LOOP區(qū)突變率。Calcein A

3、M-PI以及Annexiv-V流式檢測(cè)各組的細(xì)胞凋亡水平。
　　結(jié)果：
　　第一部分：癌組織線粒體D-LOOP區(qū)突變率為31.5％，癌旁組織中的突變率為9.6%，p53發(fā)生突變的癌組織突變率為43.6%，p53未突變的癌組織突變率為22.1%存在175、248、273三個(gè)突變位點(diǎn)的癌組織突變率中248位點(diǎn)高于其他兩個(gè)位點(diǎn)。 www.pdfjm.cnz
　　第二部分：1、H2O2誘導(dǎo) HCT116-/-細(xì)胞 COII轉(zhuǎn)錄

4、水平低于對(duì)照組細(xì)胞，同時(shí)其D-LOOP區(qū)突變率增高。2、p53的過表達(dá)組的COII轉(zhuǎn)錄水平高于單獨(dú)H2O2誘導(dǎo)組，同時(shí)D-LOOP區(qū)突變率降低。3、H2O2氧化性損傷所誘導(dǎo)的線粒體損傷細(xì)胞組在奧沙利鉑作用下的凋亡率低于正常對(duì)照組。
　　結(jié)論：
　　1、癌組織線粒體D-LOOP區(qū)突變率高于癌旁組織。
　　2、p53發(fā)生突變的癌組織突變率高于p53未突變的癌組織。
　　3、175、248、273位點(diǎn)突變的癌組織突變率