3-呋喃基吲唑衍生物的合成及其抗肝纖維化活性研究.pdf

1、吲唑是一類重要的有機合成中間體，它在很多藥物中扮演著非常有效的藥效團。比如，3-(5’-甲氧基-2’-呋喃基)-1-芐基吲唑，即YC-1，它具有多種藥理活性，可作為可溶性鳥苷酸環(huán)化酶的激活劑，缺氧誘導因子HIF-1抑制劑等。相對于YC-1的抗癌等活性研究，其抗肝纖維化活性少有報道。肝纖維化是肝臟對許多慢性炎癥刺激的損傷修復反應，是許多慢性肝病發(fā)展為肝硬化甚至肝癌的必經階段。因此，合成一系列新的呋喃吲唑化合物，對其抗肝纖維化進行深入研究十

2、分必要。本研究合成了一系列新的呋喃吲唑衍生物及YC-1，通過體外實驗，以人肝星狀細胞（LX-2）為肝纖維化細胞模型，研究其抗肝纖維化活性及其初步作用機制。
　　本研究主要內容包括：⑴考慮到電荷分布對活性的影響，同時，在藥物分子適當位置引入大體積基團，因其空間位阻，可保護藥物分子活性部位免受非靶蛋白的攻擊，增加藥物分子的穩(wěn)定性。因此，將分別在呋喃吲唑環(huán)的1號位N上或呋喃環(huán)上引入羰基及剛性大體積烷基，合成新的呋喃吲唑衍生物用于抗肝纖維

3、化研究。⑵通過CCK-8實驗考察所有化合物對LX-2細胞增殖活性的影響。用不同濃度（0,5,25,50,100uM）的化合物預處理細胞24小時，然后用CCK-8處理細胞1h,檢測細胞活力，篩選出活性較好化合物進行下一步實驗。⑶通過流式細胞儀檢測著重考察FIAC，FIPOC，FIMPa及YC-1四種化合物對LX-2細胞凋亡的影響。25uM四種化合物分別預處理細胞24或48小時，先用顯微鏡觀察LX-2細胞形態(tài)變化，后收集細胞用分別PI單染或

4、Annexin V FITC/PI雙染處理，用流式細胞儀檢測細胞凋亡情況。⑷通過western blot實驗考察四種化合物對α-SMA和caspase-3蛋白表達的影響。用25uM四種化合物分別預處理細胞1、3、12小時，收集細胞提取蛋白質進行檢測。⑸合成了YC-1及N上含甲?；洼^大體積烷基的FIAC，FIACA，FIPOC，FIPOCA四種化合物，呋喃環(huán)上含丙炔酰胺基的FIMPa，以及含缺電子烯烴結構的FIMC等9種衍生物。⑹FIA

5、C，FIPOC，FIMPa，YC-1，FIMA，FIA對L X-2細胞增殖有明顯抑制作用，其中IC50值分別為48.7,49.0,115.3，78.5,73.8,75.0uM；含有缺電子烯烴結構的9種衍生物對LX-2細胞有明顯的增殖促進作用。⑺FIAC，FIPOC，FIMPa，YC-1四種化合物都能夠誘導LX-2細胞凋亡，尤其FIAC,25uM濃度下處理48h誘導細胞死亡率達到53.9％。⑻四種化合物都能抑制α-SMA蛋白表達，并且具有

6、時間依賴性，與對照組相比，其中FIAC在3h時抑制效果達到50%以上，比YC-1抑制效果明顯提高；同時四種化合物都能夠促進caspase-3蛋白表達、激活，進而誘導細胞凋亡。其中FIAC促進作用尤為明顯，比對照組提高了2倍以上，可作為潛在的抗肝纖維化試劑。⑼與原有合成方法相比，本論文合成方法反應條件更溫和，縮短了合成步驟，提高了產率。體外實驗證實,新化合物FIAC、FIPOC、FIMPa能夠通過抑制a-SMA表達，進而抑制LX-2細胞活