血管舒緩素對(duì)重癥急性胰腺炎合并缺血再灌注損傷大鼠胰腺微循環(huán)影響的研究.pdf

1、目的:
　　重癥急性胰腺炎（SAP）是臨床中較為兇險(xiǎn)的急癥，致死率較高。多種因素造成對(duì)胰腺組織的打擊，誘發(fā)多種炎癥介質(zhì)的瀑布樣級(jí)聯(lián)反應(yīng)和細(xì)胞因子應(yīng)激紊亂，導(dǎo)致全身炎性反應(yīng)綜合征（SIRS），隨之打破與之拮抗的代償性反應(yīng)綜合癥（ CARS）的平衡,并直接引起多器官功能衰竭（MODS）。
　　胰腺炎發(fā)病的共同通路是胰腺缺血再灌注損傷（IRI），尤其是在從急性水腫型胰腺炎（AP）即輕型胰腺炎，向重癥急性胰腺炎演變過程中起到至關(guān)重要

2、的作用，具體表現(xiàn)為胰腺微血流降低、微血管通透性增加、血液流變學(xué)的變化及胰腺組織炎細(xì)胞的浸潤(rùn)等。預(yù)防和改善SAP合并IRI，對(duì)減輕胰腺組織壞死，阻止SIRS及MODS有重要意義。
　　血管舒緩素（PK）作為一種活化因子，由18種氨基酸和4種糖所組成，其在人體內(nèi)逐漸降解激肽原釋放出大量激肽，激肽又對(duì)微血管和毛細(xì)血管起作用，促使二者擴(kuò)張，同時(shí)擴(kuò)大了血管網(wǎng)之間的交匯，對(duì)微血管的通透性有明顯改善作用，并增加血流量；同時(shí)可以抑制血管緊張素之間

3、的轉(zhuǎn)化，減輕小血管收縮作用；通過改善凝血時(shí)間及抑制鈣離子，引起毛細(xì)血管內(nèi)皮細(xì)胞PGI2的生成減少，減少血小板的聚集，尚可以使纖溶酶原激活成纖溶酶，降低纖維蛋白含量，預(yù)防微血管血栓形成；并能調(diào)控機(jī)體的炎癥反應(yīng)過程。
　　本實(shí)驗(yàn)以雄性Wistar大鼠為研究對(duì)象，采用5％?；悄懰徕c逆行胰膽管注入結(jié)合脾動(dòng)脈30分鐘夾閉的方法，建立SAP合并IRI模型；并通過經(jīng)大鼠尾靜脈泵入PK的方法進(jìn)行藥物干預(yù)。
　　應(yīng)用CHEMIX-800全自動(dòng)

4、生化分析儀測(cè)定大鼠血清AMY/LIP；以ELISA法測(cè)定大鼠血清TNF-a/IL-1β表達(dá)水平；大鼠血漿內(nèi)毒素水平以鱟試劑基質(zhì)偶氮顯色法檢測(cè)；并通過胰腺組織肉眼觀察及使用光學(xué)顯微鏡進(jìn)行胰腺病理評(píng)分；從四個(gè)方面檢測(cè)PK對(duì)SAP合并IRI大鼠病情的影響。
　　胰腺微循環(huán)血流以Preflux4001雙通道激光多普勒血流儀進(jìn)行測(cè)定；胰腺微血管通透性通過伊文氏藍(lán)方法進(jìn)行測(cè)定；血液流變學(xué)改變以血液流變儀進(jìn)行測(cè)定；以流式細(xì)胞儀測(cè)定粘附因子CD1

5、8、CD54的水平；從以上四個(gè)方面探討PK對(duì)SAP合并IRI大鼠胰腺微循環(huán)影響的作用機(jī)制。
　　方法：
　　1實(shí)驗(yàn)動(dòng)物
　　雄性Wistar大鼠，3-4月齡，體重300-350g，清潔級(jí)，北京隆安實(shí)驗(yàn)動(dòng)物養(yǎng)殖中心提供，自由飲水及進(jìn)食。
　　2動(dòng)物分組
　　實(shí)驗(yàn)第一部分：60只大鼠隨機(jī)分為兩大組，每大組30只。每大組大鼠再隨機(jī)分為3小組，每組10只，分別為假手術(shù)組、SAP合并IRI組， SAP合并IRI且PK

6、干預(yù)組，所有大鼠均造模并給藥后12小時(shí)處死進(jìn)行檢測(cè)。第一組大鼠造模12小時(shí)后開腹，經(jīng)腹主動(dòng)脈采血5毫升，平均分為兩等份，一份檢測(cè)血清 AMY/LIP；另一份檢測(cè)大鼠血清炎癥介質(zhì)TNF-a/IL-1β表達(dá)水平。第二組大鼠于造模12h后開腹，肉眼觀察胰腺組織大體變化；再經(jīng)腹主動(dòng)脈采血5毫升，檢測(cè)血漿內(nèi)毒素水平；最后處死大鼠，取100毫克胰腺組織，浸泡于10%福爾馬林，取出后包埋蠟塊，切成4um薄片，附于玻片并HE染色，進(jìn)行胰腺病理學(xué)評(píng)分。<

7、br>　　實(shí)驗(yàn)第二、三、四、五部分：每一個(gè)實(shí)驗(yàn)部分大鼠各30只，隨機(jī)各分為三組，每組大鼠10只，分別為假手術(shù)組、SAP合并IRI組，SAP合并IRI且PK干預(yù)組，所有大鼠均造模并給藥后12小時(shí)處死，分別檢測(cè)大鼠胰腺微循環(huán)血流；胰腺微血管通透性；血液流變學(xué)；白細(xì)胞粘附因子CD18、血管內(nèi)皮細(xì)胞粘附因子CD54表達(dá)水平。
　　3實(shí)驗(yàn)?zāi)Ｐ偷慕?br>　　3.1 SAP合并IRI模型建立：采用改進(jìn)的Aho等的SAP造模方法，首先腹腔內(nèi)注

8、射3%戊巴比妥鈉30mg/kg，麻醉成功后將大鼠固定于手術(shù)板，剪去腹部毛發(fā)，常規(guī)消毒鋪巾。取上腹正中切口3cm逐層入腹，首先確認(rèn)十二指腸位置，片狀胰腺組織在其內(nèi)側(cè)，打開十二指腸前壁并找到胰膽管。小號(hào)動(dòng)脈夾夾住肝十二指腸韌帶肝門側(cè)以阻斷膽管，于胰膽管開口處以24G針頭予以穿刺，針頭進(jìn)入胰膽管0.5cm后縫扎針頭予以固定，將針頭連接微量輸液泵，經(jīng)胰膽管逆行注入5%?；悄懰徕c，劑量0.1ml/kg，速度0.2ml/min。大約5-10min后

9、胰腺組織充血水腫，壓迫穿刺點(diǎn)后縫合十二指腸前壁。參考Fujimoto等的IRI造模方法，SAP模型建立后，動(dòng)脈夾立即夾閉脾動(dòng)脈30min再松開，胰腺組織局部缺血，腹腔臟器復(fù)位后臨時(shí)關(guān)腹。大鼠造模前12小時(shí)禁食、4小時(shí)禁水，模型建立后立即背部皮下注入生理鹽水5毫升，允許自由飲水并注意保暖。
　　3.2 SAP合并IRI且PK干預(yù)組模型建立：SAP合并IRI大鼠模型建立后，將大鼠四肢固定于木質(zhì)托盤上，40-45度溫水浸泡尾靜脈半分鐘，

10、使其血管充血，擦干備用。選擇5號(hào)注射針頭，以30度角距尾尖2厘米進(jìn)針，平行向前，見回血時(shí)立即參考藥物使用說明書給藥。PK按2U/只，溶于NS5ml，尾靜脈持續(xù)泵入注藥，連續(xù)12小時(shí)。
　　3.3假手術(shù)組模型建立：以SAP模型建立的方法操作，不同的是逆行胰膽管注入同等劑量的生理鹽水，且物理翻動(dòng)胰腺組織，動(dòng)作重復(fù)3次，余條件相同。實(shí)驗(yàn)動(dòng)物均符合醫(yī)學(xué)倫理學(xué)管理標(biāo)準(zhǔn)。
　　4 PK對(duì)SAP合并IRI大鼠病情變化指標(biāo)影響的檢測(cè)

11、　　4.1 PK對(duì)SAP合并IRI大鼠血清AMY/LIP的檢測(cè)
　　大鼠血清AMY/LIP檢測(cè)采用全自動(dòng)生化檢：第一組大鼠造模后12h開腹，經(jīng)腹主動(dòng)脈采血5毫升，平均分為兩等份，取一份血液標(biāo)本置入密封的采血管中靜置1小時(shí)，離心10分鐘（3000r/min），血清AMY/LIP以CHEMIX-800全自動(dòng)生化分析儀進(jìn)行測(cè)定。
　　4.2 PK對(duì)SAP合并IRI大鼠血清炎癥介質(zhì)TNF-a/IL-1β表達(dá)的檢測(cè)
　　大鼠血清

12、炎癥介質(zhì)TNF-a/IL-1β表達(dá)通過ELISA法檢測(cè)：取第一組大鼠另一份血液標(biāo)本，置入密封采血管后靜置1小時(shí)，離心10分鐘（3000r/min），取血清放入-20℃冰箱中保存，待行ELISA檢測(cè)，TNF-a/IL-1β水平檢測(cè)方法嚴(yán)格按試劑盒操作說明書的要求進(jìn)行。
　　4.3 PK對(duì)SAP合并IRI大鼠血漿內(nèi)毒素水平的檢測(cè)
　　大鼠血漿內(nèi)毒素以鱟試劑基質(zhì)偶氮顯色法進(jìn)行檢測(cè)：第二組大鼠造模后12小時(shí)常規(guī)開腹，首先觀察胰腺大體

13、變化，后經(jīng)腹主動(dòng)脈采血5毫升，按照鱟試劑盒說明書要求，首先對(duì)試驗(yàn)器材進(jìn)行去熱源處理，留取標(biāo)準(zhǔn)血樣并配置試劑，吸管吸取血清0.1毫升，與0.05毫升鱟試劑均勻混合，放置于37℃水浴箱3分鐘，之后取出，并加入0.5毫升亞硝酸鈉混勻，隨后再加入0.5毫升氨基磺酸氨，最后加入0.5毫升奈乙二胺均勻混合，隨后波長(zhǎng)545納米以723分光光度計(jì)進(jìn)行比色讀數(shù)。計(jì)算公式： A=As-（Ab-Abb），求得吸光度A值后，查對(duì)內(nèi)毒素標(biāo)準(zhǔn)曲線并求得內(nèi)毒素的含量

14、。
　　4.4 PK對(duì)SAP合并IRI大鼠胰腺病理評(píng)分的評(píng)估
　　大鼠胰腺病理評(píng)分采用光學(xué)顯微鏡法：第二組大鼠抽血檢測(cè)血清內(nèi)毒素前，首先觀察胰腺組織大體變化；后取100毫克胰腺組織，浸泡于10%福爾馬林，取出后包埋成蠟塊并切成4微米薄片，附于玻片HE染色，在光學(xué)顯微鏡下觀察，參考Grewal的方法并加以改進(jìn)，從四個(gè)方面即水腫、出血、壞死、炎性浸潤(rùn)等評(píng)分，每項(xiàng)指標(biāo)分別為0、1、2、3、4五個(gè)分值，最后匯總并計(jì)算總分。
　

15、　5 PK對(duì)SAP合并IRI大鼠胰腺微循環(huán)血流影響的檢測(cè)：
　　各組大鼠于造模給藥后12h常規(guī)開腹，用Preflux4001雙通道激光多普勒血流儀測(cè)定胰腺微循環(huán)血流各項(xiàng)指標(biāo)，探頭口徑0.25mm,波長(zhǎng)780nm。探頭輕輕接觸胰腺組織表面，首先分別測(cè)定胰頭、胰尾處血流，之后選取胰頭-胰尾測(cè)量連線中點(diǎn)的胰體處進(jìn)行測(cè)定，避開血腫組織及胰腺大血管，取算術(shù)平均值為最終結(jié)果。具體檢測(cè)指標(biāo)包括胰腺微血管血流量、血流速度，微動(dòng)脈、微靜脈管徑，毛細(xì)

16、血管管徑、密度、灌注等指標(biāo)。
　　6 PK對(duì)SAP合并IRI大鼠胰腺微血管通透性影響的檢測(cè)：
　　采用改進(jìn)的Keiji等方法進(jìn)行檢測(cè)，各組大鼠檢測(cè)胰腺微循環(huán)血流之后，從股靜脈注入1%伊文氏蘭，劑量2ml/kg，胰腺組織30分鐘后取出，稱濕重后，取150毫克組織置入5毫升試管，按照0.03/mg加入甲酰胺。24h后取浸出液1毫升，通過分光光度計(jì)檢測(cè)伊文氏蘭的濃度，伊文氏蘭的漏出量依次計(jì)算；剩余胰腺組織剪碎，置于160度的電熱干

17、燥箱內(nèi)，24小時(shí)后予以稱重，以濕/干重之比計(jì)算150mg胰腺組織干重；微血管通透性最后以伊文氏蘭漏出量/胰腺組織干重（ug/g）表示。
　　7 PK對(duì)SAP合并IRI大鼠血液流變學(xué)影響的檢測(cè)：
　　采用BV-100血流變儀檢測(cè)大鼠血液流變學(xué)。各組大鼠模型建立后12小時(shí)常規(guī)開腹，經(jīng)腹主動(dòng)脈采血5毫升置入不凝管，均勻搖晃，置BV-100血流變測(cè)試儀送檢。檢測(cè)指標(biāo)包括全血高、中、低切邊率下、血漿粘度、全血還原粘度；紅細(xì)胞聚集指數(shù)、

18、血沉及血沉方程K值；紅細(xì)胞變形指數(shù)及紅細(xì)胞剛性指數(shù)；紅細(xì)胞壓積，纖維蛋白原。
　　8 PK對(duì)SAP合并IRI大鼠白細(xì)胞粘附因子CD18、血管內(nèi)皮細(xì)胞粘附因子CD54表達(dá)水平影響的檢測(cè)：
　　粘附因子 CD18、CD54檢測(cè)采用流式細(xì)胞儀法。各組大鼠模型建立后12小時(shí)常規(guī)開腹，經(jīng)腹主動(dòng)脈采血5毫升，EDTA抗凝，取100微升離心10分鐘，1500r/min；取3支管標(biāo)記A、B、C。A管加入20ul CD45-perCP、20u

19、l CD18-FITC，B管加入20ul CD45-perCP、20ul CD54-PE，C管加入20ul CD45-perCP、20ul同型對(duì)照IgG抗體，室溫避光孵育40min；3支管分別加入1毫升溶血素，混勻放置10分鐘，避光常溫，離心5分鐘800r/min；為清除未結(jié)合的抗體，去上清液再PBS洗兩次，再離心5分鐘800r/min兩次，加入多聚甲醛1g/L固定后上機(jī)檢測(cè)；流式細(xì)胞儀熒光檢測(cè)變異系數(shù)首先調(diào)整，一般穩(wěn)定在2%左右，再調(diào)

20、整光電倍增管電壓、靈敏度、閾值及顏色補(bǔ)償，此時(shí)流式細(xì)胞儀處于最佳工作狀態(tài)，488納米氬離子激光為光源，F(xiàn)ITC受激發(fā)后出現(xiàn)綠色的熒光；啟動(dòng)Elite分析軟件，分別測(cè)定中性粒細(xì)胞前向散射光及側(cè)向散射光，并測(cè)定其MFI。
　　9統(tǒng)計(jì)方法：
　　統(tǒng)計(jì)采用 SAS8.0軟件包:大鼠血清 AMY/LIP、炎癥介質(zhì)TNF-a/IL-1β、內(nèi)毒素及胰腺微循環(huán)血流、胰腺微血管通透性、血液流變學(xué)、白細(xì)胞-血管內(nèi)皮細(xì)胞粘附因子CD18、CD54

21、表達(dá)結(jié)果以“ x±s”表示，組間顯著性差異比較采用方差分析，P<0.05為有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異；病理評(píng)分為等級(jí)資料，組間顯著性差異比較采用Chi square test，P<0.05為有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。
　　結(jié)果：
　　1 PK對(duì)SAP合并IRI大鼠病情指標(biāo)影響的檢測(cè)結(jié)果
　　1.1 PK對(duì)SAP并IRI大鼠血清AMY/LIP影響的檢測(cè)結(jié)果：
　　1.1.1與假手術(shù)組比較， SAP合并 IRI模型組造模后12h，大鼠血清AM

22、Y/LIP出現(xiàn)明顯升高， AMY由123.38±30.25 u/L迅速上升至2536.47±269.43 u/L，LIP由81.47±12.25u/L迅速上升至746.36±85.32u/L，二者升高均具有顯著性差異，P<0.01。
　　1.1.2與SAP合并IRI模型組比較，SAP合并IRI且PK干預(yù)組造模后12小時(shí)，大鼠血清AMY/LIP明顯降低，AMY由2536.47±269.43 u/L下降至1867.45±139.86

23、u/L，LIP由746.36±85.32u/L下降至568.27±108.43 u/L，二者降低均具有顯著性差異，P<0.05。
　　1.2 PK對(duì)SAP合并IRI大鼠血清炎癥介質(zhì)TNF-a/IL-1β表達(dá)影響的檢測(cè)結(jié)果：
　　1.2.1與假手術(shù)組比較，SAP合并IRI模型組造模后12h，大鼠血漿TNF-a和 IL-1β表達(dá)出現(xiàn)明顯升高， TNF-a由3.91±0.41 pmol/L迅速上升至18.63±3.52pmol/L

24、，組間差異P<0.01；IL-1β由108.32±26.65 pg/ml上升至269.86±45.87 pg/ml，組間差異P<0.01，二者升高均有顯著性意義。
　　1.2.2與SAP合并IRI組模型組比較，SAP合并IRI且PK干預(yù)組造模后12h，大鼠血漿TNF-a和IL-1β表達(dá)水平出現(xiàn)一定程度的降低，TNF-a由18.63±3.52pmol/L降至15.67±3.09pmol/L，組間差異 P>0.05；IL-1β由269

25、.86±45.87 pg/ml降至245.76±35.13 pg/ml，組間差異P>0.05，二者降低均無顯著性意義。
　　1.3 PK對(duì)SAP合并IRI大鼠血清內(nèi)毒素表達(dá)影響的檢測(cè)結(jié)果：
　　1.3.1與假手術(shù)組比較，SAP合并 IRI模型組造模后12h，大鼠血漿內(nèi)毒素出現(xiàn)明顯升高，由23.38±3.25 EU/L迅速上升至146.67±20.43 EU/L，升高有顯著性差異，P<0.01。
　　1.3.2與SAP合

26、并IRI組模型組比較，SAP合并IRI且PK干預(yù)組造模后12h，大鼠血漿內(nèi)毒素出現(xiàn)明顯降低，由146.67±20.43 EU/L降至127.56±22.48 EU/L，降低無顯著性差異，P>0.05。
　　1.4 PK對(duì)SAP合并IRI大鼠胰腺組織病理改變影響的檢測(cè)結(jié)果：
　　1.4.1大鼠胰腺組織改變?nèi)庋塾^察：假手術(shù)組大鼠胰腺質(zhì)地良好，無明顯水腫，胃腸道擴(kuò)張不明顯，腹腔內(nèi)無明顯腹水。SAP合并IRI組胰腺充血、水腫明顯，伴

27、有片狀出血、局灶樣壞死及皂化斑，并出現(xiàn)血性腹水。SAP合并IRI且PK干預(yù)組胰腺組織仍有充血、水腫、片狀出血、局灶樣壞死，皂化斑，血性腹水等，但均有所緩解，尤其是片狀出血，局灶樣壞死。1.4.2光學(xué)顯微鏡下大鼠胰腺病理評(píng)分：假手術(shù)組大鼠胰腺組織水腫，但無明顯出血壞死，間質(zhì)亦無明顯炎細(xì)胞浸潤(rùn)。SAP合并IRI組則胰腺明顯水腫，伴有明顯的片狀出血、壞死及大量炎細(xì)胞浸潤(rùn)。SAP合并 IRI且PK干預(yù)組大鼠胰腺仍有水腫及片狀出血、壞死及炎細(xì)胞浸

28、潤(rùn)等表現(xiàn)，但均出現(xiàn)一定程度的改善。
　　2 PK對(duì)SAP合并IRI大鼠胰腺微循環(huán)影響的檢測(cè)結(jié)果：
　　2.1 PK對(duì)SAP合并IRI大鼠胰腺微血管血流量及血流速度影響的檢測(cè)結(jié)果：
　　2.1.1與空白對(duì)照組比較，SAP并IRI組造模后12小時(shí)，胰腺微循環(huán)血流量由355.72±26.07下降至263.31±20.95，胰腺微循環(huán)血流速度由101.91±11.81下降至76.63±14.79，血流量組間差異 P<0.01，

29、血流速度組間差異P<0.05，組間比較有顯著性差異。
　　2.1.2與SAP并IRI組比較，PK處理組胰腺微循環(huán)血流量由263.31±20.95上升至307.37±30.23，胰腺微循環(huán)血流速度由76.63±14.79上升至88.42±13.32，組間差異P<0.05。
　　2.2．PK對(duì)SAP合并IRI大鼠胰腺微動(dòng)脈及微靜脈管徑影響的檢測(cè)結(jié)果：
　　2.2.1與空白對(duì)照組比較，SAP并 IRI組造模后12h，胰腺微動(dòng)

30、脈管徑由17.72±4.07 um下降至8.31±3.05 um，組間差異P<0.01；胰腺微靜脈管徑由24.91±3.81um下降至23.63±3.79um，組間差異P>0.05。
　　2.2.2與SAP并IRI組比較，PK處理組造模后12h后，胰腺微動(dòng)脈管徑由8.31±3.05um上升至12.46±4.33um，組間差異P<0.05；胰腺微靜脈管徑由23.63±3.79um上升至24.67±4.12um，組間差異P>0.05。

31、
　　2.3．PK對(duì)SAP合并IRI大鼠胰腺毛細(xì)血管管徑、密度、灌注影響的檢測(cè)結(jié)果：
　　2.3.1與空白對(duì)照組比較，SAP并IRI組造模后12h，胰腺毛細(xì)血管管徑出現(xiàn)變細(xì)，由5.72±1.07 um下降至3.11±1.15um；毛細(xì)血管密度降低，由426.91±23.81下降至297.63±14.79；二者比較有顯著性差異，P<0.01；毛細(xì)血管灌注形式由穩(wěn)定變?yōu)殚g歇不規(guī)則。
　　2.3.2與SAP并IRI組比較，P

32、K處理組造模后12h后，胰腺毛細(xì)血管管徑出現(xiàn)增粗，由3.11±1.15um上升至4.13.±1.21um；毛細(xì)血管密度增加，由297.63±14.79上升至355.16±27.65；二者比較有顯著性差異，P<0.05，；毛細(xì)血管灌注形式雖略有好轉(zhuǎn)，仍為間歇不穩(wěn)定。
　　3．PK對(duì)SAP合并IRI大鼠胰腺微血管通透性影響的檢測(cè)結(jié)果：
　　3.1與假手術(shù)組比較，SAP合并IRI模型組造模后12小時(shí)后，胰腺微血管通透性明顯增強(qiáng)，由

33、92.47±14.64 ug/g急速上升至986.42±138.72ug/g，組間差異P<0.01，有顯著性意義。
　　3.2與SAP合并IRI模型組比較，PK處理組胰腺微血管通透性明顯降低，由986.42±138.72ug/g下降至705.23±96.63ug/g，組間差異P<0.05，有顯著性意義。
　　4 PK對(duì)SAP合并IRI大鼠血液流變學(xué)影響的檢測(cè)結(jié)果
　　4.1 PK對(duì)SAP合并IRI大鼠血液粘度影響的檢測(cè)

34、結(jié)果：
　　4.1.1與假手術(shù)組比較，SAP合并IRI組大鼠造模12小時(shí)血液低、中、高切邊率下全血粘度，血漿粘度，低、高切邊率下全血還原粘度均明顯上升，分別由6.45±0.47上升至9.67±0.38，3.64±0.34上升至4.75±0.48，3.17±0.31上升至4.29±0.38，1.06±0.08上升至1.65±0.13，5.47±0.42上升至8.79±0.61，3.17±0.31上升至4.29±0.38，組間比較有顯

35、著性差異，P<0.05。
　　4.1.2與SAP合并IRI組比較，PK處理組造模12小時(shí)血液低、中、高切邊率下全血粘度，血漿粘度，低、高切邊率下全血還原粘度全面下降，分別由9.67±0.38下降至7.75±0.51，由4.75±0.48下降至4.12±0.41，由4.29±0.38下降至3.68±0.29，由1.65±0.13下降至1.32±0.10，由8.79±0.61下降至7.25±0.51，由4.29±0.38下降至3.68

36、±0.29，組間差異均P<0.05，組間差異有顯著性意義。
　　4.2 PK對(duì)SAP合并IRI大鼠紅細(xì)胞聚集性影響的檢測(cè)結(jié)果：
　　4.2.1與假手術(shù)組比較，SAP合并IRI組大鼠造模12小時(shí)紅細(xì)胞聚集指數(shù)、血沉、血沉方程K值上升，分別由2.13±0.15上升至2.41±0.11，3.98±1.15上升至6.21±1.94，9.42±1.44上升至16.48±3.38，組間差異均P<0.05，組間差異有顯著性意義。
　

37、　4.2.2與SAP合并IRI組比較，PK處理組造模12小時(shí)紅細(xì)胞聚集指數(shù)、血沉、血沉方程K值下降，分別由2.41±0.11下降至2.23±0.14，由6.21±1.94下降至4.82±1.36，由16.48±3.38下降至12.23±2.63，組間差異均P<0.05，組間差異有顯著性意義。
　　4.3 PK對(duì)SAP合并IRI大鼠紅細(xì)胞變形性影響的檢測(cè)結(jié)果：
　　4.3.1與假手術(shù)組比較， SAP合并IRI組大鼠造模12小時(shí)

38、紅細(xì)胞變形指數(shù)、紅細(xì)胞剛性指數(shù)上升，分別由0.78±0.15上升至1.98±0.34，2.21±0.15上升至4.78±0.24，組間比較有顯著性差異，P<0.05。
　　4.3.2與SAP合并IRI組比較，PK處理組造模12小時(shí)，紅細(xì)胞變形指數(shù)、紅細(xì)胞剛性指數(shù)下降，分別由1.98±0.34下降至1.28±0.22，由4.78±0.24下降至4.02±0.16，組間比較有顯著性差異，P<0.05。
　　4.4 PK對(duì)SAP合

39、并IRI大鼠紅細(xì)胞壓積及纖維蛋白原影響的檢測(cè)結(jié)果：
　　4.4.1與假手術(shù)組比較， SAP并IRI組大鼠造模12小時(shí)紅細(xì)胞壓積及纖維蛋白原上升，分別由38.13±4.15上升至52.45±3.23，3.16±0.25上升至6.46±1.34，組間比較有顯著性差異，P<0.05。
　　4.4.2與SAP并IRI組比較，PK處理組造模12小時(shí)，紅細(xì)胞壓積及纖維蛋白原下降，分別由52.45±3.23下降至42.27±3.54，由6

40、.46±1.34下降至4.82±1.08，組間比較有顯著性差異，P<0.05。
　　5、PK對(duì)SAP合并IRI大鼠血清CD18、CD54影響的檢測(cè)結(jié)果
　　5.1與假手術(shù)組比較，SAP合并IRI模型組造模后12小時(shí)后，大鼠血清CD18、CD54分別由7.67±1.23上升至29.67±5.23，9.35±2.47上升至31.15±9.36，組間差異P<0.01，有顯著性意義。
　　5.2與SAP合并IRI模型組比較，P

41、K處理組血清CD18、CD54分別由29.67±5.23下降至20.67±4.29，31.15±9.36下降至24.19±6.26，組間差異P<0.05，有顯著性意義。
　　結(jié)論:
　　1逆行經(jīng)胰膽管泵入5%牛磺膽酸鈉制備SAP大鼠動(dòng)物模型，方法穩(wěn)定可靠，可操作性強(qiáng)，胰腺病理變化典型。
　　2在SAP大鼠模型建立基礎(chǔ)之上，阻斷脾動(dòng)脈30 min再開放的方法制備IRI大鼠模型，穩(wěn)定性高，全身情況影響小，血清酶學(xué)改變及胰腺

42、病理改變符合實(shí)驗(yàn)要求。
　　3 SAP合并IRI大鼠血清AMY/LIP明顯升高，使用PK干預(yù)后血清AMY/LIP明顯降低，表明PK可以降低SAP合并IRI大鼠血清酶學(xué)水平。
　　4 SAP合并IRI大鼠血清TNF-a及IL-lβ的水平明顯升高，使用PK干預(yù)后血清TNF-a及IL-lβ的水平有所降低，但降低水平無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，表明PK不能減輕SAP合并IRI大鼠血漿炎癥介質(zhì)水平。
　　5 SAP合并IRI大鼠血清內(nèi)毒素水平

43、明顯升高，PK干預(yù)后血清內(nèi)毒素水平雖然略有降低，但降低無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異，說明 PK不能減輕 SAP合并IRI大鼠血漿內(nèi)毒素水平。
　　6 SAP合并IRI大鼠胰腺組織水腫、出血、壞死、炎細(xì)胞浸潤(rùn)均較重，使用PK干預(yù)后，大鼠肉眼及顯微鏡下胰腺組織病理均得到改善，表明PK是緩解SAP合并IRI大鼠胰腺炎癥的有效手段。
　　7 PK可以明顯改善SAP合并IRI大鼠胰腺微循環(huán)血流量及血流速度；擴(kuò)張微動(dòng)脈；擴(kuò)張胰腺毛細(xì)血管管徑，升高其分布

44、密度，使其灌注狀態(tài)趨于穩(wěn)定，起到改善胰腺微循環(huán)的作用。
　　8 PK可以明顯改善SAP合并IRI大鼠胰腺微血管通透性，從而起到減少胰腺間質(zhì)及周圍組織的滲出的作用。
　　9 PK可以明顯改善SAP合并IRI大鼠全血高、中、低切邊率下、血漿粘度、全血還原粘度；紅細(xì)胞聚集指數(shù)、血沉及血沉方程K值；紅細(xì)胞變形指數(shù)及剛性指數(shù)；紅細(xì)胞壓積，纖維蛋白原，從而起到減少改善胰腺微循環(huán)血流，預(yù)防胰腺微循環(huán)血栓的作用。
　　10 PK可以明