黃芪超濾物對(duì)H22腹水瘤小鼠重離子放療的增敏作用及機(jī)制探討.pdf

1、目的：本實(shí)驗(yàn)旨在觀察黃芪超濾物（ultra-filtration extract mixture from Astragalus Mongholicus,UEMAM）對(duì)H22腹水瘤小鼠重離子放療的增敏作用及其相關(guān)的作用機(jī)制，為UEMAM聯(lián)合重離子放療治療惡性腹水提供實(shí)驗(yàn)室依據(jù)。
　　方法：
　　1：制備惡性腹水瘤小鼠模型后隨機(jī)分為4組，分別按50、100、150mg/kg/d的UEMAM和等體積生理鹽水（NS）灌胃成模小鼠，

2、觀察各組小鼠日常生活狀態(tài)，統(tǒng)計(jì)各組小鼠腹圍、體重、腹水量及生存期，計(jì)算腹水抑制率及生命延長(zhǎng)率，以確定最佳后續(xù)試驗(yàn)的UEMAM干預(yù)劑量。
　　2：制備惡性腹水瘤小鼠模型后隨機(jī)分為4組，即對(duì)照組、UEMAM組、放療組及UEMAM加放療組，分別給予等體積生理鹽水灌胃、UEMAM灌胃、6Gy12C6+離子束外照射及UEMAM聯(lián)合6Gy12C6+離子束外照射處理。觀察各組小鼠日常生活狀態(tài)，統(tǒng)計(jì)各組小鼠腹圍、體重、腹水量及生存期，計(jì)算腹水抑制

3、率及生命延長(zhǎng)率。并進(jìn)一步采用流式細(xì)胞術(shù)（FCM）檢測(cè)各組 H22腹水瘤細(xì)胞的凋亡率；單細(xì)胞凝膠電泳技術(shù)（SCGE）觀察各組腹水瘤細(xì)胞 DNA損傷情況；聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)技術(shù)（PCR）及免疫印跡法（WB）檢測(cè)P53、Bax、Bcl-2及Cleaved Caspase-3在基因及蛋白水平上的表達(dá)情況。
　　結(jié)果：
　　1：UEMAM低、中、高劑量組與對(duì)照組小鼠比較，中、高劑量組的UEMAM均可以有效抑制惡性腹水的生成，提高腹水瘤小鼠

4、的生活質(zhì)量，延長(zhǎng)腹水瘤小鼠的生存期，差異均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），而低劑量組與對(duì)照組小鼠比較，差異并無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。此外，中、高劑量組比較，二者差異亦無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05），故選則100mg· kg-1·d-1作為后續(xù)試驗(yàn)的最佳藥物劑量。
　　2：后續(xù)實(shí)驗(yàn)中UEMAM加放療組小鼠體重、腹圍、腹水量均明顯低于其它各組（P＜0.05），且 UEMAM加放療組小鼠生存時(shí)間最長(zhǎng)，生命延長(zhǎng)率最高，與其它各組比較，

5、差異均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。
　　3：FCM結(jié)果顯示各治療組小鼠腹水瘤細(xì)胞凋亡率均隨時(shí)間延長(zhǎng)而增高，且在各時(shí)間點(diǎn)均以UEMAM加放療組凋亡率最高，與其它各組比較，差異均具有顯著的統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.01）。
　　4：SCGE結(jié)果顯示UEMAM加放療組腹水瘤細(xì)胞DNA損傷最嚴(yán)重，與其它各組比較，差異均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。
　　5：PCR及WB技術(shù)檢測(cè)均顯示，與其它各組比較，UEMAM加放療組能明顯上

6、調(diào)P53、Bax及Cleaved Caspase-3的基因及蛋白水平，下調(diào)Bcl-2的基因及蛋白水平，差異均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。
　　結(jié)論：UEMAM對(duì)H22腹水瘤小鼠重離子放療具有輻射增敏作用，其增敏作用機(jī)制可能與激活P53介導(dǎo)的細(xì)胞凋亡信號(hào)途徑有關(guān)，通過抑制H22腹水瘤細(xì)胞損傷的DNA雙鏈修復(fù)，上調(diào)P53、Bax基因及蛋白水平，下調(diào)Bcl-2基因及蛋白水平，并通過線粒體激活其下游的信號(hào)通路分子 Cleaved Ca