芒果苷改善高果糖所致HepG2細(xì)胞內(nèi)甘油三酯沉積的作用機(jī)制研究.pdf

1、目的：
　　非酒精性脂肪肝是非酒精性脂肪肝病的標(biāo)志，可發(fā)展成為嚴(yán)重的肝病，近年來發(fā)病率持續(xù)上升，嚴(yán)重危害國民身體健康，但是對(duì)于非酒精性脂肪肝目前尚無針對(duì)性的化學(xué)合成藥物，而中醫(yī)藥卻在越來越多的臨床應(yīng)用中凸顯了優(yōu)勢(shì)。
　　芒果苷是一種從傳統(tǒng)中草藥提取的活性成份，廣泛被用于抗炎抗病毒、抗腫瘤、糖尿病、肥胖等疾病，但其作用機(jī)理尚不清楚。本實(shí)驗(yàn)采用人肝癌細(xì)胞株HepG2細(xì)胞模型研究芒果苷對(duì)高果糖誘導(dǎo)的肝細(xì)胞甘油三酯沉積的作用及機(jī)制，

2、旨在為芒果苷防治非酒精性脂肪肝提供理論依據(jù)。
　　方法：
　　DMEM低糖(1g/L葡萄糖)條件下培養(yǎng)的HepG2細(xì)胞分為對(duì)照組(1g/L葡萄糖，無果糖)、果糖組(1g/L葡萄糖+30mmol/L果糖)、果糖+芒果苷組(同時(shí)加入葡萄糖濃度1g/L+30mmol/L果糖+不同劑量的芒果苷，使其藥物終濃度分別為6.25μmol/L、12.5μmol/L、25μmol/L、50μmol/L、100μmol/L、200μmol/L)

3、，藥物干預(yù)24h之后，MTT試驗(yàn)尋找最適藥物濃度范圍，在最適藥物濃度范圍下，油紅O染色法觀察細(xì)胞內(nèi)脂滴的沉積情況，甘油三酯酶法測(cè)定細(xì)胞內(nèi)甘油三脂(TG)的含量，Real-time PCR檢測(cè)碳水化合物反應(yīng)元件結(jié)合蛋白(ChREBP)、固醇調(diào)節(jié)元件結(jié)合蛋白1c(SREBP-1c)、肝型丙酮酸激酶（LPK）、二脂酰甘油?；D(zhuǎn)移酶2（DGAT-2）mRNA表達(dá)的變化。采用SPSS19.0統(tǒng)計(jì)分析軟件對(duì)所有數(shù)據(jù)進(jìn)行處理，以均值±標(biāo)準(zhǔn)誤(?x±s

4、)表示，多組均數(shù)比較采用單因素方差分析，各組間兩兩多重比較采用LSD檢驗(yàn)，P<0.05表示差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　結(jié)果：
　　1.MTT結(jié)果顯示當(dāng)芒果苷的濃度低于50μmol/L時(shí)，細(xì)胞活力幾乎不受影響，當(dāng)芒果苷濃度高于50μmol/L時(shí)，隨著藥物濃度的升高，細(xì)胞的活力明顯下降，所以為了排除藥物毒性對(duì)細(xì)胞活性的影響，我們后續(xù)試驗(yàn)采用50μmol/L以下濃度的芒果苷進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。
　　2.油紅 O染色結(jié)果顯示，與對(duì)照組相比，

5、果糖組細(xì)胞內(nèi)的脂滴數(shù)量明顯增多；較低劑量的芒果苷(6.25μmol/L和12.5μmol/L)對(duì)果糖導(dǎo)致的細(xì)胞內(nèi)脂滴的沉積無明顯改變，較高劑量的芒果苷(25μmol/L和50μmol/L)使細(xì)胞內(nèi)的脂滴數(shù)量明顯減少，以50μmol/L芒果苷改善效果最顯著。
　　3.甘油三酯酶法測(cè)定細(xì)胞內(nèi)TG的含量，結(jié)果顯示與對(duì)照組相比，果糖組細(xì)胞內(nèi)甘油三酯含量明顯升高(P<0.05)，低劑量的芒果苷對(duì)果糖導(dǎo)致的細(xì)胞內(nèi)脂滴的沉積無影響，而較高劑量的

6、芒果苷(25μmol/L和50μmol/L)干預(yù)24h后，細(xì)胞內(nèi)TG含量降低(與果糖組比較，P<0.05)，從藥物劑量上來看，以50μmol/L藥物劑量改善作用最顯著。
　　4.Real-time PCR結(jié)果顯示，與對(duì)照組相比，果糖組 HepG2細(xì)胞ChREBP、SREBP-1c、LPK、DGAT-2 mRNA明顯升高，50μmol/L芒果苷能夠下調(diào)HepG2細(xì)胞ChREBP、LPK、DGAT-2 mRNA的高表達(dá)(P<0.05)