ZAG對棕櫚酸誘導的HepG2細胞內(nèi)甘油三酯沉積的影響及機制.pdf

1、目的：構建重組人ZAG（Zinc-α2 glycoprotein）真核表達載體，并瞬時轉染HepG2細胞，觀察HepG2細胞過表達ZAG后對棕櫚酸誘導的甘油三酯沉積的影響。
　　方法：提取HepG2細胞總RNA，通過RT-PCR方法擴增出ZAG序列，克隆入經(jīng) XhoI和 SacII雙酶切后的pIRES2-ZsGreen1，重組人 ZAG真核表達質(zhì)粒（pIRES2-ZsGreen1-hZAG）通過核苷酸測序鑒定。使用不同濃度pIRE

2、S2-ZsGreen1-hZAG的經(jīng)脂質(zhì)體轉染HepG2細胞24小時，western-blotting鑒定ZAG陽性細胞，并采用棕櫚酸誘導該細胞脂肪變性，采用油紅O染色觀察各組細胞內(nèi)脂滴情況，酶聯(lián)免疫法檢測細胞內(nèi)甘油三酯的水平。
　　結果：1.成功構建人ZAG基因的真核表達載體pIRES2-ZsGreen1-hZAG，該載體轉染HepG2細胞后，能顯著增加ZAG蛋白的表達。
　　2.與對照組相比，過表達ZAG的HepG2細胞

3、能減少棕櫚酸誘導的細胞內(nèi)甘油三酯含量；油紅O染色結果顯示過表達ZAG的HepG2細胞在棕櫚酸誘導后細胞內(nèi)橘紅色脂滴較對照組HepG2細胞明顯減少。
　　結論：1.構建了ZAG基因的真核表達載體pIRES2-ZsGreen1-hZAG，并成功轉入HepG2細胞。
　　2．過表達ZAG能減少棕櫚酸誘導的HepG2細胞甘油三酯的沉積。
　　目的：探討ZAG降低棕櫚酸誘導的HepG2內(nèi)甘油三酯沉積機制。
　　方法：體外培

4、養(yǎng)HepG2細胞和建立ZAG瞬時過表達HepG2細胞，分別加入或不加入棕櫚酸干預，應用Western blotting在蛋白水平檢測代謝性核受體(SREBP1c、PPARα、LXRα和FXR)、脂肪酸合成（ACC、FAS）、脂肪酸β-氧化基因表達。
　　結果：1.與對照組相比，棕櫚酸干預組SREBP-1c、LXRα、ACC、FAS的表達增加，F(xiàn)XR、PPARα的表達降低。
　　2.與空白載體組相比，過表達 ZAG組 FXR和

5、 CPT1A表達增加，而SREBP-1c表達下降。
　　3.在棕櫚酸干預下，過表達ZAG組較空白載體組FXR、PPARα、CPT1表達增加，SREBP-1c、LXRα、ACC、FAS表達減少。
　　結論：1.棕櫚酸能通過增加SREBP-1c、LXRα、ACC、FAS的表達，降低PPARα、FXR的表達促進HepG2細胞內(nèi)甘油三酯的沉積。
　　2．過表達ZAG能增加FXR和CPT1A的表達，降低SREBP-1c的表達。<