Omega-3治療大鼠干眼的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、干眼是一種常見(jiàn)的眼科疾病，影響人們的生活質(zhì)量。當(dāng)前干眼在世界范圍內(nèi)的發(fā)病率大約在5.5％到33.7％之間。在美國(guó)，流行病學(xué)顯示干眼的各個(gè)年齡階段的發(fā)病率不盡相同，大概從5％到43％之間，隨著年齡越大發(fā)病率越高。在美國(guó)，50歲以上干眼患者大概有491萬(wàn)，其中女性患者323萬(wàn)、男性患者168萬(wàn)。中國(guó)流行病學(xué)顯示干眼發(fā)病率大概在21％到30％之間，與亞洲其他國(guó)家相比發(fā)病率相似，但高于美國(guó)及其歐洲國(guó)家。
　　干眼病因繁多，炎癥反應(yīng)、細(xì)胞凋

2、亡、性激素水平下降以及外界因素影響是其主要病因，其中炎癥在干眼的發(fā)病機(jī)制中起到重要的作用。無(wú)論哪一種類(lèi)型的干眼都會(huì)引起眼表炎癥，而眼表炎癥又會(huì)加重干眼。例如干眼時(shí)淚液滲透壓升高或是淚膜不穩(wěn)定引起眼表炎癥，眼表炎癥反過(guò)來(lái)影響淚腺細(xì)胞的功能甚至導(dǎo)致淚腺細(xì)胞凋亡，受損的淚腺細(xì)胞引起淚液成分的改變，導(dǎo)致淚液滲透壓升高，同時(shí)淚腺細(xì)胞減少導(dǎo)致淚液分泌量下降，形成一個(gè)惡性循環(huán)。
　　由于干眼發(fā)病機(jī)制復(fù)雜，現(xiàn)階段干眼缺乏有效的治療。人工淚液和淚小

3、點(diǎn)栓塞只是增加淚液的量起到對(duì)癥治療的作用;對(duì)瞼板腺進(jìn)行清潔、按摩、熱敷，只能改善蒸發(fā)過(guò)強(qiáng)型干眼的癥狀;糖皮質(zhì)激素在一定程度上可以控制炎癥，但是它有著嚴(yán)重的副作用;環(huán)孢素盡管在長(zhǎng)期療效上比糖皮質(zhì)激素更適合，但它不是對(duì)每個(gè)患者都有效。因此尋找新的有效的干眼治療方法，減輕干眼癥狀，提高患者的生活質(zhì)量就顯得十分急迫。近期有學(xué)者研究發(fā)現(xiàn)，口服omega-3可以起到治療干眼的作用。
　　目的:
　　探討omega-3治療苯扎氯銨誘導(dǎo)的大

4、鼠干眼的療效及其可能機(jī)制。
　　方法:
　　1.實(shí)驗(yàn)分組:45只6～8周齡SD大鼠，裂隙燈檢查無(wú)異常，淚液分泌量及角膜熒光素染色未見(jiàn)異常。采用隨機(jī)數(shù)字表法分為空白組、對(duì)照組、實(shí)驗(yàn)組?？瞻捉M15只、對(duì)照組15只、實(shí)驗(yàn)組15只。實(shí)驗(yàn)組給予omega-3魚(yú)油脂肪乳(含59.1％ omega-3)灌胃，每次1ml，1次/d，連續(xù)2月。對(duì)照組給予橄欖油灌胃，每次1ml，1次/d，連續(xù)2月?？瞻捉M給予生理鹽水灌胃，每次1ml，1次/d，

5、連續(xù)2月。
　　2.建立干眼模型:2個(gè)月后，omega-3組、欖油組、生理鹽水組分別接受15天的苯扎氯銨誘導(dǎo)干眼。（選擇SD大鼠右眼制作干眼模型，每眼每次滴5μ10.2％苯扎氯銨，每天2次）。建模期間灌胃同前。
　　3.檢測(cè)指標(biāo):干眼誘導(dǎo)前、干眼誘導(dǎo)后第5天、第10天、第15天行淚液量的測(cè)量、淚膜破裂時(shí)間和角膜上皮熒光素染色評(píng)分。干眼誘導(dǎo)15天后，行大鼠角膜、結(jié)膜、瞼板腺蘇木精-伊紅染色病理學(xué)檢查，Western blot定

6、量檢測(cè)角膜、結(jié)膜、瞼板腺組織中腫瘤壞死因子α（tumor necrosis factorα，TNF-α）表達(dá)水平的變化、白介素6（interleukin-6，IL-6）表達(dá)水平的變化。
　　4.統(tǒng)計(jì)分析:利用SPSS13.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，所有實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)以平均值±標(biāo)準(zhǔn)差表示。在4個(gè)時(shí)間點(diǎn)檢測(cè)淚液量、淚膜破裂時(shí)間和角膜上皮熒光素染色評(píng)分，三組間的比較采用單因素方差分析，組間多重比較采用SNK法。P＜0.05為差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。干

7、眼誘導(dǎo)15天后，Western blot法檢測(cè)三組間TNF-a、IL-6的表達(dá)水平變化，三組間的比較采用單因素方差分析，組間多重比較采用SNK法。P＜0.05為差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　結(jié)果:
　　1.omega-3組、橄欖油組，生理鹽水組三組間淚液分泌量在干眼誘導(dǎo)前、干眼誘導(dǎo)后第5天、第10天、第15天分別為（11.95±1.45，11.02±1.27，10.96±1.57）;(10.06±1.35，9.89±1.85，9

8、.67±1.74);(9.98±1.27，8.01±1.43，7.89±1.12);（9.56±1.34，5.66±1.41，5.76±1.53）。干眼誘導(dǎo)前、干眼誘導(dǎo)后第5天、第10天比較omega-3組、橄欖油組、生理鹽水組三組間淚液分泌量的差異，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。第15天omega-3組淚液分泌量相比橄欖油組和生理鹽水組淚液分泌量明顯多，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P=0.023，P=0.027)。
　　2.omega-3組、橄欖油組

9、，生理鹽水組三組間淚膜破裂時(shí)間在干眼誘導(dǎo)前、干眼誘導(dǎo)后第5天、第10天、第15天分別為（9.72±0.82，9.21±0.69，9.61±0.72）;（9.05±0.94，7.44±0.87，7.20±0.83）;（8.95±1.16，6.47±0.97，6.38±0.72）;（7.73±1.05，4.65±0.95，4.80±0.65）。干眼誘導(dǎo)前、干眼誘導(dǎo)后第5天比較omega-3組、橄欖油組，生理鹽水組三組間淚膜破裂時(shí)間的差異，差

10、異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，第10天、第15天omega-3組淚膜破裂時(shí)間相比橄欖油組和生理鹽水組淚膜破裂時(shí)間明顯長(zhǎng)，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P=0.037，P=0.032);(P=0.024，P=0.020)
　　3.omega-3組、橄欖油組，生理鹽水組三組間角膜熒光素染色評(píng)分在干眼誘導(dǎo)前、干眼誘導(dǎo)后第5天、第10天、第15天分別為(0.00±0.00，0.00±0.00，0.00±0.00);(2.38±1.34，2.78±1.51，2.83

11、±1.31);(2.93±1.02，4.49±1.64,4.69±1.05);（3.18±1.04，6.32±1.21，6.37±1.32）。干眼誘導(dǎo)前、干眼誘導(dǎo)后第5天、第10天比較omega-3組、橄欖油組，生理鹽水組三組間角膜熒光素染色評(píng)分的差異，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。第15天omega-3組角膜熒光素染色評(píng)分相比橄欖油組和生理鹽水組角膜熒光素染色評(píng)分明顯少，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P=0.012，P=0.015)。
　　4.角膜組織

12、病理學(xué):干眼誘導(dǎo)后第15天，omega-3組的角膜組織與正常角膜組織相似，可見(jiàn):角膜上皮細(xì)胞層次正常較扁平，表層細(xì)胞不角化，基底細(xì)胞排列整齊，基質(zhì)層無(wú)水腫。橄欖油組和生理鹽水組的角膜組織與正常角膜組織差異較大，橄欖油組和生理鹽水組:角膜上皮細(xì)胞層次明顯增加，表層細(xì)胞不規(guī)則缺失，基底細(xì)胞排列紊亂，基質(zhì)層少許水腫。
　　5.結(jié)膜組織病理學(xué):干眼誘導(dǎo)后第15天，omega-3組的結(jié)膜組織與正常結(jié)膜組織相似，可見(jiàn):結(jié)膜上皮結(jié)構(gòu)完整，排列較

13、規(guī)則，結(jié)膜上皮細(xì)胞增殖不明顯，基底層細(xì)胞排列整齊，少許炎性細(xì)胞浸潤(rùn)。橄欖油組和生理鹽水組的結(jié)膜組織與正常結(jié)膜組織差異較大，橄欖油組和生理鹽水組均可見(jiàn):結(jié)膜上皮結(jié)構(gòu)不完整，排列不規(guī)則，結(jié)膜上皮細(xì)胞增生，基底層細(xì)胞排列不整齊，可見(jiàn)炎性細(xì)胞浸潤(rùn)。
　　6.瞼板腺組織病理學(xué)觀察:干眼誘導(dǎo)后第15天，omega-3組、橄欖油組和生理鹽水組的瞼板腺組織與正常瞼板腺組織相類(lèi)似，三組均可見(jiàn):結(jié)締組織深入實(shí)質(zhì)將腺組織分割成大小不等的小葉。腺泡細(xì)胞大

14、小均勻，細(xì)胞核大小一致，腺泡內(nèi)層為柱狀上皮細(xì)胞，核居基底部，腺管呈一同心圓狀，管壁厚度正常。
　　7.Western blot檢測(cè)各組間TNF-a表達(dá)水平變化
　　omega-3組、橄欖油組、生理鹽水組三組間角膜組織中TNF-a表達(dá)水平為(0.34±-0.01，0.913±0.04，0.90±0.04)。omega-3組TNF-a表達(dá)量低于橄欖油組TNF-a表達(dá)量，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P=0.000);omega-3組TNF

15、-a表達(dá)量低于生理鹽水組TNF-a表達(dá)量，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P=0.000);橄欖油組TNF-a表達(dá)量與生理鹽水組TNF-a表達(dá)量相似，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　omega-3組、橄欖油組、生理鹽水組三組間結(jié)膜組織中TNF-a表達(dá)水平為(0.52±0.27，1.44±0.14，1.43±0.33)。omega-3組TNF-a表達(dá)量低于橄欖油組TNF-a表達(dá)量，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P=0.026); omega-3組TNF-a表達(dá)量

16、低于生理鹽水組TNF-a表達(dá)量，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P=0.037);橄欖油組TNF-a表達(dá)量與生理鹽水組TNF-a表達(dá)量相似，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　omega-3組、橄欖油組、生理鹽水組三組間瞼板腺組織中TNF-a表達(dá)表為(2.16±0.66，2.29±0.57，2.39±0.41)差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　8.Western blot檢測(cè)各組間IL-6表達(dá)水平變化
　　omega-3組、橄欖油組、生理鹽水組三組間角

17、膜組織中IL-6表達(dá)水平為(0.38±0.02，1.01±0.07，0.95±0.03)。omega-3組IL-6表達(dá)量低于橄欖油組IL-6表達(dá)量，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P=0.000); omega-3組IL-6表達(dá)量低于生理鹽水組IL-6表達(dá)量，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P=0.000)。橄欖油組IL-6表達(dá)量與生理鹽水組IL-6表達(dá)量相似，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　結(jié)論:
　　1.在苯扎氯銨誘導(dǎo)大鼠的干眼模型中，omega-3能