多發(fā)性骨髓瘤細(xì)胞中Blimp1對(duì)ATF4-CHOP信號(hào)通路的影響.pdf

1、目的：
　　通過研究正常漿細(xì)胞和惡性漿細(xì)胞中Blimp1基因與內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激誘導(dǎo)的ATF4/CHOP細(xì)胞凋亡通路的關(guān)系，探討B(tài)limp1在多發(fā)性骨髓瘤細(xì)胞中的抗凋亡機(jī)制；通過阿司匹林體外刺激U266細(xì)胞，探討阿司匹林抗骨髓瘤細(xì)胞的機(jī)制。
　　方法：
　?。?）收集40例初診的未經(jīng)治療的多發(fā)性骨髓瘤患者和30例骨髓相對(duì)正常者（骨髓細(xì)胞形態(tài)學(xué)顯示為正?；蛱匕l(fā)性血小板減少性紫癜或缺鐵性貧血的患者）的骨髓液，采用免疫磁珠法分選CD

2、138+的漿細(xì)胞，實(shí)時(shí)熒光定量PCR方法檢測細(xì)胞中Blimp1，ATF4和CHOPmRNA表達(dá)水平。
　?。?）將U266骨髓瘤細(xì)胞分為空白對(duì)照組，陰性對(duì)照組（陰性對(duì)照載體）和陽性實(shí)驗(yàn)組（LV-Blimp1-RNAi(40051-2)），轉(zhuǎn)染72h后，熒光定量PCR檢測各組細(xì)胞中Blimp1，ATF4和CHOPmRNA的表達(dá)水平。
　?。?）在96孔培養(yǎng)板中，用不同濃度的阿司匹林溶液（0，0.5，2.5，5.0mmol/L）

3、體外刺激U266細(xì)胞，分別于刺激24h、48h、72h，用CCK-8方法檢測阿司匹林對(duì)細(xì)胞的增殖活性的抑制作用。
　?。?）在6孔培養(yǎng)板中，用不同濃度的阿司匹林溶液（0，0.5，2.5，5.0mmol/L）體外刺激U266細(xì)胞，刺激72h后，收集細(xì)胞，熒光定量PCR檢測各組細(xì)胞中Blimp1，ATF4和CHOPmRNA的表達(dá)水平。
　　使用SPSS17.0和GraphPadPrism5軟件對(duì)所得數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)和分析，所有資料數(shù)

4、據(jù)均符合正態(tài)分布，用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差表示。兩獨(dú)立樣本均數(shù)的比較采用獨(dú)立樣本t檢驗(yàn)，多組定量資料均數(shù)的比較采用單因素方差分析，組間兩兩比較采用Bonferroni檢驗(yàn)。α=0.05作為顯性檢驗(yàn)水準(zhǔn)。
　　結(jié)果：
　　1、Blimp1,ATF4和CHOP在正常漿細(xì)胞和惡性漿細(xì)胞中的表達(dá)水平：
　　和正常漿細(xì)胞比較，MM患者骨髓中分離的惡性漿細(xì)胞中Blimp1mRNA表達(dá)水平顯著升高（(1.106±0.161)vs(2.527±

5、0.355)，P<0.05），ATF4和CHOPmRNA表達(dá)水平顯著降低（(1.004±0.035)vs(0.753±0.108)，P<0.05；(0.990±0.056)vs(0.813±0.073)，P<0.05），差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　2、LV-Blimp1-RNAi(40051-2)慢病毒表達(dá)載體感染U266細(xì)胞72h后，對(duì)細(xì)胞中Blimp1、ATF4和CHOPmRNA表達(dá)水平的影響：
　　LV-Blimp1-R

6、NAi(40051-2)慢病毒表達(dá)載體感染U266細(xì)胞的最適MOI值為100。在MOI=100的感染條件下，熒光倒置顯微鏡觀察轉(zhuǎn)染效率>80％。與空白對(duì)照組和陰性對(duì)照組比較，陽性實(shí)驗(yàn)組中Blimp1mRNA的表達(dá)水平顯著下調(diào)((1.006±0.071)vs(0.995±0.070)vs(0.653±0.089)，F(xiàn)=60.09，P<0.001)，ATF4和CHOPmRNA表達(dá)水平顯著升高[((1.006±0.059)vs(0.989±0

7、.046)vs(1.354±0.073)，F(xiàn)=104.8，P<0.001)；((1.006±0.067)vs(1.004±0.074)vs(1.585±0.106)，F(xiàn)=149.8，P<0.001)]，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　3、不同濃度阿司匹林溶液對(duì)U266骨髓瘤細(xì)胞增殖活性的影響：
　　CCK-8方法檢測不同濃度阿司匹林刺激24h、48h、72h后，U266骨髓瘤細(xì)胞增殖活性的變化，結(jié)果顯示在0.5-5mmol/L濃度

8、范圍內(nèi)，阿司匹林可顯著抑制U266骨髓瘤細(xì)胞的增殖活性，抑制作用隨藥物刺激時(shí)間的延長和刺激濃度的增加而增強(qiáng)。
　　4、不同濃度阿司匹林溶液對(duì)U266骨髓瘤細(xì)胞中Blimp1、ATF4和CHOPmRNA的表達(dá)水平的影響：
　　不同濃度阿司匹林刺激72h后，U266細(xì)胞中Blimp1的表達(dá)水平隨藥物濃度升高而依次降低，而ATF4和CHOP的表達(dá)水平隨藥物濃度升高而依次升高。
　　結(jié)論：
　　1.Blimp1可通過干擾