河北地區(qū)漢族人群KIR及其HLA配體基因多態(tài)性研究.pdf

1、目的:殺傷細(xì)胞免疫球蛋白樣受體(Killer cell Immunoglobulin-likereceptors，KIR)是自然殺傷細(xì)胞(Natural Killer cel1，NK細(xì)胞)和某些T細(xì)胞表面表達(dá)的一組蛋白受體，可通過與人類白細(xì)胞抗原(humanleukocyte antigen，HLA)-Ⅰ類分子特異性結(jié)合，調(diào)節(jié)NK細(xì)胞的活性。研究表明，KIR分子與靶細(xì)胞的HLA-Ⅰ類分子特異性識別后發(fā)揮作用，參與移植物抗宿主病(GVHD

2、)的發(fā)生并且影響移植物抗白血病(GVL)作用，從而造成對器官移植效果的差異。因此，精確檢測KIR分子與HLA-Ⅰ類分子是否相合，對于臨床移植和預(yù)后評估有非常重要的意義。依據(jù)蛋白質(zhì)的結(jié)構(gòu)不同，KIR分子分為抑制性KIR受體和激活性KIR受體。由于激活性KIR轉(zhuǎn)導(dǎo)的激活性信號較弱，甚至檢測不到，因此，NK細(xì)胞主要通過抑制性KIR特異性結(jié)合MHC-Ⅰ類分子來傳導(dǎo)抑制性信號從而阻止對自身細(xì)胞的殺傷作用。
　　由于KIR和HLA基因均具有高

3、度的多態(tài)性以及它們各自獨立遺傳的特點，并且KIR對其HLA配體具有識別特異性，導(dǎo)致個體間會出現(xiàn)不同的受體/配體組合型。目前河北地區(qū)尚無系統(tǒng)性KIR基因研究數(shù)據(jù)，并且河北地區(qū)漢族人群的遺傳背景具有其特異性。當(dāng)前國內(nèi)外研究發(fā)現(xiàn)，不同的遺傳背景、種族溯源使得KIR/HLA-Ⅰ組合特點不盡相同。
　　本研究的目的在于應(yīng)用PCR-SSP的方法，研究河北地區(qū)漢族人群KIR及其HLA配體基因多態(tài)性，并統(tǒng)計其基因頻率。這將對臨床移植供者的選擇提供

4、有力的支持，同時對了解河北漢族種族溯源有一定的意義。
　　方法:
　　1.制備基因組DNA
　　標(biāo)本來自隨機抽取的中國造血干細(xì)胞捐獻(xiàn)者資料庫河北分庫河北籍漢族健康無血緣關(guān)系志愿者325名（已完善HLA分型數(shù)據(jù)），采用TIANGEN血液基因組DNA純化試劑盒提取DNA，并對提取到的DNA進(jìn)行純度和濃度測定，應(yīng)滿足OD260/OD280比值為1.7-1.9，濃度30ng/μl左右。
　　2.基因分型
　　采用聚

5、合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)—序列特異性引物擴增(PCR-SSP)做KIR基因檢測。登陸中華骨髓庫網(wǎng)站查詢HLA-A，HLA-B的基因分型結(jié)果。
　　3.PCR產(chǎn)物凝膠電泳分析
　　將PCR擴增產(chǎn)物轉(zhuǎn)移至瓊脂糖凝膠電泳，在紫外/凝膠成像系統(tǒng)下觀察結(jié)果并拍攝成像，并解釋分型結(jié)果。
　　4.統(tǒng)計學(xué)處理
　　各KIR基因和HLA基因的基因頻率均采用基因直接計數(shù)法進(jìn)行計算。河北地區(qū)325名漢族人群HLA基因頻率和KIR基因頻率與國內(nèi)其他

6、地區(qū)人群以及國外其他地區(qū)人群基因頻率的比較采用x2檢驗。
　　結(jié)果:
　　1325名河北地區(qū)漢族造血干細(xì)胞捐獻(xiàn)者的已知的16個KIR基因型的基因頻率如下:
　　KIR2DL1基因頻率為99.38％, KIR2DL2基因頻率為18.77％, KIR2DL3基因頻率為99.38％，KIR2DL4基因頻率為100.00％，KIR2DL5基因頻率為44.00％，KIR3DL1基因頻率為94.15％，KIR3DL2基因頻率為10

7、0.00％, KIR3DL3基因頻率為100.00％, KIR2DS1基因頻率為34.15％,KIR2DS2基因頻率為17.85％，KIR2DS3基因頻率為18.46％，KIR2DS4基因頻率為93.23％，KIR2DS5基因頻率為23.08％，KIR3DS1基因頻率為37.85％, KIR2DP1基因頻率為99.38％, KIR3DP1基因頻率為100.00％。
　　2325名河北地區(qū)漢族造血干細(xì)胞捐獻(xiàn)者的HLA-A、B等位基因

8、對應(yīng)HLA-A Bw4、B Bw4的檢測結(jié)果如下:
　　HLA-A*2301的基因頻率為0.15％;HLA-A*2402的基因頻率為14.31％，HLA-A*2403的基因頻率為0.15％，HLA-A*2420的基因頻率為0.31％; HLA-A*3201的基因頻率為1.69％。HLA-B*1301的基因頻率為3.85％，HLA-B*1302的基因頻率為6.31％，HLA-B*13VJ的基因頻率為0.15％; HLA-B*1517

9、的基因頻率為0.46％; HLA-B*2702的基因頻率為0.15％，HLA-B*2704的基因頻率為0.62％，HLA-B*2705的基因頻率為0.92％，HLA-B*2707的基因頻率為0.15％，HLA-B*2736的基因頻率為0.15％，HLA-B*27YNER的基因頻率為0.15％; HLA-B*3701的基因頻率為2.15％，HLA-B*37AD的基因頻率為0.46％; HLA-B*3801的基因頻率為0.77％，HLA-B

10、*3802的基因頻率為2.00％，HLA-B*38XV的基因頻率為0.62％，HLA-B*38ACNUA的基因頻率為0.15％，HLA-B*38ACNUB的基因頻率為0.15％; HLA-B*4402的基因頻率為1.85％，HLA-B*4403的基因頻率為3.08％; HLLA-B*5201的基因頻率為5.23％，HLA-B*52DFT的基因頻率為0.31％; HLA-B*5701的基因頻率為0.92％; HLA-B*5801的基因頻率

11、為2.31％，HLA-B*58VE的基因頻率為0.15％。
　　3325名河北地區(qū)漢族造血干細(xì)胞捐獻(xiàn)者的KIR/Bw4的配對情況統(tǒng)計如下:
　　不含有KIR和HLA Bw4配受體對的人約占24.62％，46.77％的人群僅含有3DL1和HLA Bw4配受體對，4.62％的人群僅含有3DS1和HLABw4配受體對，24.00％的人群同時含有3DL1/HLA Bw4和3DS1/HLABw4配受體對。
　　結(jié)論:
　　

12、1.本研究對325人份河北地區(qū)漢族造血干細(xì)胞捐獻(xiàn)者的KIR基因分布進(jìn)行統(tǒng)計分析，發(fā)現(xiàn)框架基因2DL4、3DL2、3DL3、3DP1幾乎存在于所有個體中，2DL1、2DL3、3DL1、2DS4、2DP1的頻率較高，均＞93.00％，而2DL2、2DS2、2DS3、2DS5的頻率則較低。
　　2.抑制性的KIR/HLA在河北漢族人群中的分布更為廣泛。這基本符合中國漢族人群的分布特點，但又具有自己的特點。
　　3.本次研究掌握了河