EGF及ADAM9在皮膚黑色素瘤中的表達(dá)及意義.pdf

1、背景：
　　皮膚黑色素瘤（Cutaneous maligant mlanoma,CMM）是一種由皮膚黑色素細(xì)胞惡變而來(lái)的腫瘤，惡性程度極高，多發(fā)生于皮膚及粘膜，為皮膚腫瘤中惡性程度最高的一類，容易早期發(fā)生血性轉(zhuǎn)移和/或淋巴轉(zhuǎn)移，皮膚惡性黑色素瘤侵襲轉(zhuǎn)移過(guò)程非常復(fù)雜，可能是多種病因及因素相互作用的結(jié)果，預(yù)后極差，近年來(lái)發(fā)病率及死亡率均呈明顯上升趨勢(shì)，嚴(yán)重危害人類健康，研究與黑色素瘤侵襲轉(zhuǎn)移的相關(guān)因素及其在該疾病發(fā)生發(fā)展過(guò)程中的作用，

2、將為黑色素瘤的診療提供理論依據(jù)。
　　表皮生長(zhǎng)因子（Epidermal growth factor，EGF）為一類細(xì)胞因子，其基因定位于4號(hào)染色體（即4q25.27）。轉(zhuǎn)錄的信使RNA全長(zhǎng)約4.75KB，編碼蛋白質(zhì)分子量約6KD，其前體蛋白質(zhì)由1217個(gè)氨基酸殘基組成，經(jīng)加工后的EGF由53個(gè)氨基酸組成的多肽鏈，其生物學(xué)功能需與表皮生長(zhǎng)因子受體（Epidermal growth factor receptor，EGFR)）結(jié)合后發(fā)

3、揮，EGFR即ErbB1具有酪氨酸蛋白激酶活性，與ErbB2(HER2/neu)，ErbB3(HER3)及ErbB4(HER4)同屬于ErbB家族，EGF與EGFR結(jié)合后酪氨酸蛋白激酶活性被激活，進(jìn)而作用于下游的信息傳遞通路，如RAS/Raf/MEK/ERK/MAPK信號(hào)通路，PLCγ信號(hào)通路，PI3K/PDKl/AKt（PK）信號(hào)通路以及JAK/STAT信號(hào)通路。以此影響癌細(xì)胞的增殖、侵襲及遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移。
　　去整合素-金屬蛋白酶9

4、（A disintegrin and metalloproteinase9,ADAM9）基因定位于8號(hào)染色體上（即8p11.23），與去整合素-金屬蛋白酶家族（A disintegrin and metalloproteinase,ADAMs）結(jié)構(gòu)相似，同樣自氮端至碳端涵蓋8個(gè)結(jié)構(gòu)域，其中以去整合素結(jié)構(gòu)域、金屬基質(zhì)蛋白酶結(jié)構(gòu)域最為重要，與腫瘤細(xì)胞侵襲能力及轉(zhuǎn)移能力關(guān)系密切，ADAM9金屬蛋白酶活性可酶解剪切很多膜錨定蛋白質(zhì)的外功能域，剪

5、切脫落的外功能域參與信號(hào)傳導(dǎo)通路。其中包括表皮生長(zhǎng)因子（EGF），在ADAM9金屬蛋白酶作用下外功能域水解釋放，激活EGFR后，進(jìn)一步激活下游信號(hào)傳導(dǎo)通路，從而促進(jìn)腫瘤細(xì)胞的侵襲轉(zhuǎn)移。
　　目的：
　　本實(shí)驗(yàn)通過(guò)免疫組化(IHC)SP法測(cè)定EGF、ADAM9在皮膚黑色素瘤組織、色素痣及正常皮膚中的表達(dá)情況，了解EGF、ADAM9在皮膚惡性黑色素瘤的表達(dá)及與其臨床病理學(xué)特征間的關(guān)系，并分析兩者表達(dá)是否存在相關(guān)性，初步探討兩者在

6、皮膚黑色素瘤侵襲轉(zhuǎn)移過(guò)程中的作用，為黑色素瘤新的治療和/或診斷提供理論依據(jù)。
　　材料與方法：
　　收集2011年～2016年期間于鄭州大學(xué)第一附屬醫(yī)院病理科存檔的71例蠟塊，均經(jīng)病理證實(shí)為皮膚惡性黑色素瘤，年齡在21歲～82歲之間，平均年齡57.3歲，男性37例，女性34例，根據(jù)黑色素瘤的AJCC分期法：Ⅰ～Ⅱ期29例，Ⅲ期26例，Ⅳ期16例，其中伴有淋巴轉(zhuǎn)移者42例，無(wú)淋巴轉(zhuǎn)移者29例，伴有遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移者16例，無(wú)遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移者

7、55例。35例皮膚色素痣組中，年齡在5～67歲（平均年齡36.9歲），男性16例，女性19例，25例正常皮膚組織為對(duì)照組，來(lái)自鄭州大學(xué)第一附屬醫(yī)院整形外科術(shù)中切除的正常皮膚組織。上述實(shí)驗(yàn)對(duì)象的納入標(biāo)準(zhǔn)，有完整的病史資料，無(wú)相關(guān)疾病病史，未接受激光、冷凍、放射及化學(xué)藥物等治療。各組患者在性別、年齡及病變部位方面均相當(dāng)。采用免疫組化SP法檢測(cè)71例黑色素瘤組織、35例色素痣及25例正常皮膚組織EGF及ADAM9蛋白質(zhì)的表達(dá)情況。采用SPSS

8、19.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件對(duì)實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)進(jìn)行分析，運(yùn)用卡方檢驗(yàn)及pearson法分析EGF、ADAM9蛋白表達(dá)水平及兩者的相關(guān)性，P＜0.05具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　結(jié)果：
　　1.EGF蛋白在CMM組織中細(xì)胞胞漿呈現(xiàn)棕黃色、顆粒狀，黑色素瘤細(xì)胞幾乎全部呈現(xiàn)陽(yáng)性染色，在腫瘤間葉組織細(xì)胞中陽(yáng)性染色較少，在色素痣和正常皮膚中的陽(yáng)性表達(dá)較少，EGF蛋白在CMM、色素痣、正常皮膚組織中的陽(yáng)性表達(dá)率為83.10％（59/71），31.43%（11/

9、35），28.00%（7/25），EGF蛋白在三組間陽(yáng)性表達(dá)率差異較大且具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P=0.000）。EGF蛋白的陽(yáng)性表達(dá)率在兩個(gè)實(shí)驗(yàn)組及對(duì)照組間兩兩比較結(jié)果顯示：兩個(gè)實(shí)驗(yàn)組比較，CMM明顯高于色素痣且有統(tǒng)計(jì)意義（P=0.000），兩個(gè)實(shí)驗(yàn)組分別與對(duì)照組比較，CMM明顯高于正常皮膚且有統(tǒng)計(jì)意義（P=0.000），而色素痣實(shí)驗(yàn)組較正常皮膚組的表達(dá)稍高但差異無(wú)統(tǒng)計(jì)意義（P=1.000）。將所有CMM病例發(fā)病年齡按60歲界限、性別、有無(wú)淋

10、巴結(jié)轉(zhuǎn)移、有無(wú)遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移、黑色素瘤AJCC分期分別分為兩組（除外AJCC分期按Ⅰ～Ⅱ期、Ⅲ期、Ⅳ期分為三組），按照上述陽(yáng)性判斷標(biāo)準(zhǔn)，統(tǒng)計(jì)分析發(fā)現(xiàn)EGF蛋白的陽(yáng)性表達(dá)率在發(fā)病年齡、性別等方面無(wú)差異（P＞0.05）。但隨黑色素瘤AJCC分期的增加其陽(yáng)性表達(dá)率也逐漸增高，在淋巴轉(zhuǎn)移、遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移的患者中其陽(yáng)性表達(dá)率顯著高于未發(fā)生淋巴結(jié)、遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移者，且差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05)。
　　2.ADAM9蛋白在CMM組織中細(xì)胞胞漿呈現(xiàn)棕黃色，

11、黑色素瘤細(xì)胞幾乎全部呈現(xiàn)陽(yáng)性染色，在腫瘤間葉組織細(xì)胞中陽(yáng)性染色較少，在色素痣和正常皮膚中的陽(yáng)性表達(dá)較少，ADAM9蛋白在CMM、色素痣、正常皮膚組織中的陽(yáng)性表達(dá)率為80.28%（57/71），34.29%（12/35）,12.00%（3/25），ADAM9蛋白在三組間陽(yáng)性表達(dá)率差異較大且具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P=0.000）。ADAM9蛋白的陽(yáng)性表達(dá)率在兩個(gè)實(shí)驗(yàn)組及對(duì)照組間兩兩比較結(jié)果顯示：CMM組與其他兩組比較，CMM明顯高于色素痣及對(duì)照組

12、且有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P=0.000）。而色素痣組與對(duì)照組比較，其陽(yáng)性表達(dá)率明顯高于對(duì)照組，但差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P=0.096）。ADAM9蛋白的陽(yáng)性表達(dá)率在CMM發(fā)病年齡、性別等方面無(wú)差異（P＞0.05）。但隨黑色素瘤AJCC分期的增加其陽(yáng)性表達(dá)率也逐漸增高，在淋巴轉(zhuǎn)移、遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移的患者中其陽(yáng)性表達(dá)率顯著高于未發(fā)生淋巴結(jié)、遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移者，且差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義P＜0.05。
　　3.EGF及ADAM9蛋白在CMM中表達(dá)水平相關(guān)性的分析：EGF