染氟SD大鼠海馬細(xì)胞凋亡的內(nèi)質(zhì)網(wǎng)ATF-6-CHOP途徑研究.pdf

1、目的:本研究通過體內(nèi)實(shí)驗(yàn)，探討氟中毒致神經(jīng)損傷中的內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激狀態(tài)，從而綜合性評價(jià)氟中毒對神經(jīng)損傷的影響，為闡明氟中毒致神經(jīng)損傷可能形成的機(jī)制提供新思路。
　　方法:
　　1.實(shí)驗(yàn)動物分組與處理
　　4~5周齡健康SD雄性大鼠60只，體重80-100g，隨機(jī)分為4組，每組15只，即對照組、染氟化鈉組（NaF）、染氟化鈉和抗氧化劑 NAC同時(shí)處理組，NAC處理組。對照組給予去離子水或者0.9％氯化鈉溶液灌胃處理，染氟組為按

2、照25mg/kgBw?d氟化鈉溶液進(jìn)行灌胃處理，染氟和抗氧化劑 NAC同時(shí)處理組給予25mg/kgBw?d氟化鈉和200mg/kgBw?d N-乙酰半胱氨酸（NAC）進(jìn)行灌胃處理，NAC處理組給予200mg/kgBw?d N-乙酰半胱氨酸（NAC）進(jìn)行灌胃處理。各組大鼠采用灌胃方法染毒，每周連續(xù)灌胃6天后，停灌1天，灌胃時(shí)間為7周。
　　2.氟暴露致神經(jīng)損傷相關(guān)效應(yīng)指標(biāo)檢測
　　染毒7周后，稱重、麻醉并處死動物，立即取出大鼠

3、大腦以及海馬，稱重并計(jì)算臟器系數(shù)，采用氟離子選擇電極法測定海馬回中氟的含量，TUNEL法檢測海馬組織細(xì)胞凋亡。
　　3.海馬組織中內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激相關(guān)指標(biāo)檢測
　　免疫組化法檢測海馬組織中的ATF-6蛋白，Western-blot檢測各個(gè)處理組大鼠海馬組織中GRP78、CHOP蛋白表達(dá)水平。
　　結(jié)果:
　　1.分析大鼠體重和海馬重量及其臟器系數(shù)，結(jié)果發(fā)現(xiàn)與對照組相比，NaF組的大鼠體重、海馬重量均降低，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)

4、意義；檢測海馬回中的氟
　　含量，結(jié)果發(fā)現(xiàn)與對照組相比，NaF組大鼠海馬回中氟含量明顯升高，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　2.TUNEL法檢測海馬回組織細(xì)胞凋亡水平，結(jié)果發(fā)現(xiàn)與對照組相比，NaF組細(xì)胞凋亡水平升高，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；與 NaF組相比，NaF聯(lián)合NAC組細(xì)胞凋亡水平降低，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　3.免疫組化法檢測內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激中ATF-6蛋白表達(dá)情況，結(jié)果發(fā)現(xiàn)與對照組相比，氟暴露上調(diào)了NaF組的ATF-6蛋白

5、表達(dá)水平，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　4. Western-blot檢測內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激中GRP78、CHOP蛋白表達(dá)情況，與對照組相比，染氟組的GRP78、CHOP蛋白表達(dá)顯著上升，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。而NAC和NaF組明顯抑制了GRP78和CHOP蛋白的表達(dá)上調(diào)，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　結(jié)論:
　　1.內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激是氟中毒大鼠神經(jīng)損傷的重要機(jī)制之一。
　　2.氟化鈉可能通過激活內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激中ATF-6/CHOP途徑介導(dǎo)