低劑量米非司酮對(duì)人植入窗期子宮內(nèi)膜水通道蛋白1的影響.pdf

1、米非司酮（mifepristone，RU486）是人類合成的一種19-去甲基類固醇，主要在受體水平上發(fā)揮作用。米非司酮是第一個(gè)用于臨床的孕激素受體拮抗劑，目前已廣泛應(yīng)用于抗早孕。20世紀(jì)90年代，國(guó)內(nèi)外均有報(bào)道米非司酮廣泛用于臨床緊急避孕，且用藥劑量在逐步減少。近年來(lái)，研究發(fā)現(xiàn)每日給予低劑量米非司酮，能阻止內(nèi)膜發(fā)育而起避孕作用，即所謂的“內(nèi)膜避孕”，對(duì)月經(jīng)周期影響小，無(wú)明顯副作用。體外子宮內(nèi)膜培養(yǎng)研究發(fā)現(xiàn)，米非司酮可以影響子宮內(nèi)膜的容受

2、性，從而降低妊娠率。然而，低劑量米非司酮抗著床避孕作用機(jī)制仍不完全清楚。
　　正常的妊娠過(guò)程中，子宮內(nèi)膜的容受性對(duì)妊娠的建立具有至關(guān)重要的作用。子宮內(nèi)膜組織僅在極短暫的時(shí)間內(nèi)對(duì)植入的胚胎表現(xiàn)為容受性，而在這個(gè)時(shí)間以外則排斥胚胎的植入，這個(gè)關(guān)鍵而短暫的時(shí)期被稱之為“植入窗”期，即月經(jīng)廚期第20-24天，并且以某些子宮內(nèi)膜生長(zhǎng)因子、細(xì)胞因子、黏附分子的上調(diào)為特征。其中，血管生成是胚胎著床的關(guān)鍵步驟。正常月經(jīng)周期中子宮動(dòng)脈及螺旋動(dòng)脈受卵

3、巢激素調(diào)節(jié)，血流呈周期性變化，子宮內(nèi)膜間質(zhì)水腫亦產(chǎn)生周期性變化。在胚胎即將著床時(shí)，子宮內(nèi)膜血管增生、迂曲，間質(zhì)明顯水腫疏松，但其變化機(jī)制尚不能完全明確。成功的植入有賴于子宮內(nèi)膜和胚胎的同步發(fā)育，甚至一個(gè)微小的紊亂或失調(diào)都會(huì)阻止植入的發(fā)生。因此，植入窗期子宮內(nèi)膜間質(zhì)血管生成及水腫變化將直接影響子宮內(nèi)膜的容受性。水通道蛋白1(aquaporin-1，AQP1)是唯一表達(dá)在內(nèi)皮細(xì)胞上的水通道蛋白，負(fù)責(zé)內(nèi)皮細(xì)胞跨膜和跨細(xì)胞高效水轉(zhuǎn)運(yùn)，其不僅存在

4、于分泌及吸收上皮細(xì)胞中而且在子宮內(nèi)膜間質(zhì)的毛細(xì)血管及小血管的內(nèi)皮細(xì)胞有高表達(dá)，對(duì)血管生成及血管內(nèi)皮細(xì)胞的滲透性具有調(diào)節(jié)作用。
　　目的:
　　本文利用體外培養(yǎng)系統(tǒng)，免疫組化及RT-PCR法研究低劑量米非司酮對(duì)人植入窗期子宮內(nèi)膜AQP1表達(dá)的影響;利用倒置顯微鏡、MTT法檢測(cè)低劑量米非司酮對(duì)子宮內(nèi)膜微血管密度（microvessel density, MVD）及人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞(humanumbilical vein endo

5、thelial cells，HUVECs)增殖的影響以探討低劑量米非司酮抗著床避孕作用的相關(guān)機(jī)制。
　　方法:
　　收集因輸卵管切除或丈夫不育，行IVF-ET婦女的子宮內(nèi)膜。入選婦女月經(jīng)史、生殖系統(tǒng)解剖、內(nèi)分泌等指標(biāo)均正常，近3個(gè)月內(nèi)無(wú)激素類藥物使用史，于月經(jīng)周期第20至24天取內(nèi)膜。每例內(nèi)膜分成三等份，給予不同處理（分別為對(duì)照組，65nmol/L組，200nmol/L組），組織培養(yǎng)12h。HUVECs分別給予0umol/L

6、，65nmol/L，200nmol/L，1000umol/L米非司酮處理6，12，24，48h。采用免疫組化EnVision二步法染色法及RT-PCR法檢測(cè)低劑量米非司酮對(duì)植入窗期子宮內(nèi)膜AQP1蛋白及mRNA表達(dá)的影響;利用倒置顯微鏡檢測(cè)低劑量米非司酮對(duì)子宮內(nèi)膜MVD的影響;采用MTT法檢測(cè)米非司酮對(duì)HUVECs增殖活性影響。
　　結(jié)果:
　　1.子宮內(nèi)膜組織塊體外培養(yǎng)前后形態(tài)學(xué)觀察
　　培養(yǎng)前后子宮內(nèi)膜均處于植入窗

7、期，腺體結(jié)構(gòu)完整、血管較豐富，間質(zhì)疏松水腫，各組間形態(tài)學(xué)無(wú)顯著性差異。
　　2.植入窗期子宮內(nèi)膜AQP1蛋白表達(dá)的變化
　　AQP1陽(yáng)性細(xì)胞著色為棕黃色，陽(yáng)性細(xì)胞主要分布在血管內(nèi)皮細(xì)胞表面。三組內(nèi)膜AQP1蛋白表達(dá)分別為:對(duì)照組1.6±0.3，65nmol/L組2.1±0.1，200nmol/L組2.6±0.4。兩實(shí)驗(yàn)組分別與對(duì)照組相比，顯著增高(P＜0.05）;兩實(shí)驗(yàn)組之間有顯著差異(P＜0.05）。
　　3.植入窗

8、期子宮內(nèi)膜AQP1 mRNA表達(dá)的變化
　　三組子宮內(nèi)膜AQP1mRNA表達(dá)分別為:對(duì)照組1.08±0.18，65nmol/L組1.4±0.2，200nmol/L組1.6±0.2。三組有顯著差異(P＜0.05);兩實(shí)驗(yàn)組分別與對(duì)照組相比，顯著增高(P＜0.05);兩實(shí)驗(yàn)組之間有顯著差異(P＜0.05)。
　　4.植入窗期子宮內(nèi)膜MVD的變化
　　低劑量米非司酮作用12h后，三組子宮內(nèi)膜內(nèi)膜MVD分別為:對(duì)照組350±9

9、，65nmol/L組353±5，200nmol/L組362±12。三組間MVD差異無(wú)顯著性(P＞0.05)
　　5.米非司酮對(duì)HUVECs增殖活性的影響。
　　四組（0nmol/L組，65nmol/L組，200nmol/L組，1000nmol/L組）米非司酮在不用培養(yǎng)時(shí)間(6，12，24,48h)對(duì)HUVECs增殖活性的影響。培養(yǎng)12h后，200nmol/L組及1000nmol/L組分別與對(duì)照組相比，顯著增高(P＜0.05)

10、，實(shí)驗(yàn)組1000nmol/L組與65nmol/L組之間有顯著差異(P＜0.05)，其余各組間差別無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)。
　　6.AQP1siRNA處理后米非司酮對(duì)HUVECs增殖的影響。
　　我們選用200nmol/L，1000nmol/L組培養(yǎng)12h作為標(biāo)準(zhǔn)，檢測(cè)AQP1siRNA處理后低劑量米非司酮對(duì)HUVECs增殖的影響。結(jié)果顯示，AQP1siRNA處理后能明顯減弱米非司酮對(duì)HUVECs增殖活性的影響(P＜0.