香加皮杠柳苷與TRAIL聯(lián)合對胃癌細(xì)胞的作用及其機制的研究.pdf

1、目的：研究中藥香加皮化學(xué)成分杠柳苷單獨及與TRAIL聯(lián)合應(yīng)用對胃癌細(xì)胞生長的影響，并探討其抗腫瘤機制，為其作為抗癌新藥開發(fā)提供理論依據(jù)。
　　方法：
　　1、應(yīng)用MTS法檢測香加皮杠柳苷及其與TRAIL聯(lián)合處理對胃癌細(xì)胞增殖的影響。
　　2、應(yīng)用流式細(xì)胞術(shù)、TUNEL法和Hochest法檢測香加皮杠柳苷及其與TRAIL聯(lián)合能否誘導(dǎo)胃癌細(xì)胞凋亡。
　　3、應(yīng)用Western blotting實驗檢測香加皮杠柳苷及其

2、與TRAIL聯(lián)合對細(xì)胞凋亡相關(guān)蛋白表達(dá)水平的影響。
　　4、應(yīng)用吖啶橙染色、免疫熒光法檢測香加皮杠柳苷是否通過溶酶體凋亡途徑誘導(dǎo)胃癌細(xì)胞凋亡。
　　5、應(yīng)用基因芯片篩選香加皮杠柳苷對胃癌細(xì)胞基因表達(dá)譜的影響，并用qPCR法進行驗證。
　　6、應(yīng)用Western blotting實驗檢測香加皮杠柳苷及其與TRAIL聯(lián)合對胃癌細(xì)胞中ERK1/2通路及其下游EGR1分子表達(dá)水平的影響。
　　7、應(yīng)用MTS法檢測香加皮杠

3、柳苷處理胃癌細(xì)胞后敲低EGR1對胃癌細(xì)胞增殖的影響。
　　8、應(yīng)用 BALB/c裸鼠移殖瘤模型，檢測香加皮杠柳苷及其與 TRAIL聯(lián)合應(yīng)用在體內(nèi)對胃癌細(xì)胞增殖的影響。
　　9、應(yīng)用TUNEL法檢測香加皮杠柳苷及其與TRAIL聯(lián)合在體內(nèi)是否可誘導(dǎo)胃癌細(xì)胞凋亡。
　　10、應(yīng)用免疫組化檢測香加皮杠柳苷及其與 TRAIL聯(lián)合應(yīng)用在體內(nèi)對p-ERK1/2、EGR1、Ki-67、Mcl-1、Bid、caspase-3、DR4、D

4、R5表達(dá)水平的影響。
　　結(jié)果：
　　1、MTS結(jié)果顯示，香加皮杠柳苷及其與TRAIL聯(lián)合可協(xié)同抑制胃癌細(xì)胞SGC-7901、MGC-803和BGC-823的增殖（P<0.05），且具有時間和劑量依賴性。
　　2、流式細(xì)胞術(shù)、TUNEL法和Hochest法結(jié)果均顯示，香加皮杠柳苷及其與TRAIL聯(lián)合可協(xié)同誘導(dǎo)胃癌細(xì)胞SGC-7901和MGC-803細(xì)胞凋亡（P<0.05）。
　　3、Western blottin

5、g實驗結(jié)果顯示，香加皮杠柳苷及其與TRAIL聯(lián)合可誘導(dǎo)胃癌細(xì)胞中Mcl-1、總Bid表達(dá)水平降低，caspase-3的裂解片段、DR4和DR5升高（P<0.05）。
　　4、吖啶橙染色和免疫熒光實驗結(jié)果顯示，香加皮杠柳苷可破壞胃癌細(xì)胞的溶酶體膜完整性，并有CathepsinB、CathepsinD釋放到細(xì)胞質(zhì)。
　　5、基因芯片結(jié)果顯示，香加皮杠柳苷可升高胃癌細(xì)胞中 EGR1的表達(dá)。
　　6、Western blott

6、ing實驗結(jié)果顯示，香加皮杠柳苷及其與TRAIL聯(lián)合升高胃癌細(xì)胞中p-ERK1/2、EGR1的表達(dá)水平（P<0.05）。
　　7、MTS法結(jié)果顯示，香加皮杠柳苷處理胃癌細(xì)胞后再敲低EGR1，對胃癌細(xì)胞增殖的抑制作用有所下降（P>0.05）。
　　8、體內(nèi)實驗結(jié)果顯示，香加皮杠柳苷及其與TRAIL聯(lián)合抑制胃癌移植瘤的生長（P<0.05）。
　　9、TUNEL法結(jié)果顯示，在裸鼠移植瘤組織中，香加皮杠柳苷及其與TRAIL聯(lián)合

7、可誘導(dǎo)胃癌細(xì)胞凋亡（P<0.05）。
　　10、免疫組化結(jié)果顯示，香加皮杠柳苷及其與TRAIL聯(lián)合可明顯升高胃癌細(xì)胞EGR1、p-ERK1/2、DR4和DR5表達(dá)水平，降低Mcl-1、pro-Bid、pro-caspase-3、Ki-67的表達(dá)水平。
　　結(jié)論：
　　1、香加皮杠柳苷及其與TRAIL聯(lián)合應(yīng)用可通過協(xié)同誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡抑制胃癌細(xì)胞的增殖。
　　2、香加皮杠柳苷可能是通過溶酶體途徑誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡。