經(jīng)皮冠狀動(dòng)脈栓塞建立Beagle犬急性心肌梗死模型.pdf

1、隨著生活水平的提高、生活方式的轉(zhuǎn)變以及人口老齡化的加重，心血管疾病發(fā)病率逐年增加，其中心肌梗死(MI)是主要致死因素之一。因此對心肌梗死(MI)的研究一直是重點(diǎn)，然而許多相關(guān)實(shí)驗(yàn)研究在患者或健康人身上是無法完成的，研究者們只能利用與人類心臟解剖結(jié)構(gòu)相似的動(dòng)物建立模型，模擬臨床發(fā)病過程來對疾病進(jìn)行研究。心肌梗死動(dòng)物模型的成功建立是完成相關(guān)實(shí)驗(yàn)的前提，同時(shí)為研究疾病發(fā)病機(jī)制、評價(jià)藥物療效和新型治療技術(shù)提供理論依據(jù)。但目前心肌梗死動(dòng)物模型的建

2、立仍存在諸多問題，如制備方法復(fù)雜、動(dòng)物死亡率高、造模成功率低等，未獲得滿意的結(jié)果，尤其是在介入栓塞冠狀動(dòng)脈模型上。本實(shí)驗(yàn)試想能否利用冠狀動(dòng)脈介入技術(shù)制備成功率高、死亡率低和操作簡單的心肌梗死動(dòng)物模型。
　　目的:
　　探討微栓塞球聯(lián)合凝血酶粉制劑行冠狀動(dòng)脈介入栓塞術(shù)制作穩(wěn)定的Beagle犬急性心肌梗死模型的可行性。
　　方法:
　　1.選用體重10-12kg的健康普通級(jí)Beagle犬（月齡10-13月）32只（由

3、上海新岡實(shí)驗(yàn)動(dòng)物場提供，醫(yī)院實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心飼養(yǎng)），雌雄各半。
　　2.冠狀動(dòng)脈栓塞:隨機(jī)取30只實(shí)驗(yàn)犬于3％戊巴比妥鈉(1ml/kg)靜脈注射麻醉，局部剃毛消毒，仰臥位固定于導(dǎo)管床上，穿刺股動(dòng)脈行冠狀動(dòng)脈造影，沿導(dǎo)絲送入Boston2.0×20mm預(yù)擴(kuò)球囊至LAD第二對角支處，以14atm間隔30s分別先后行1min、2min、3min缺血預(yù)適應(yīng)處理，觀察心電監(jiān)護(hù)心率變化，撤出球囊，沿導(dǎo)絲送入微導(dǎo)管至LAD第二對角支遠(yuǎn)端，經(jīng)微導(dǎo)管先

4、把聚乙烯微球2ml(4×104/ml)懸浮制劑快速注入，隨后注入凝血酶粉制劑2ml(1000u/ml)，0.3ml優(yōu)維顯造影劑沖管。間隔5min-10min行冠脈造影確認(rèn)血流阻斷后，間隔30min、1h、6h、D3、1周后復(fù)查冠脈造影，了解血管栓塞情況。
　　3.心電圖檢查及血標(biāo)本留取:于術(shù)前、術(shù)后1小時(shí)、2小時(shí)、3小時(shí)、6小時(shí)、12小時(shí)、24小時(shí)行心電圖檢查，每次連接心電圖的位置固定不變，同時(shí)段抽取靜脈血，留取血清、血漿、血細(xì)胞

5、保存至-80℃冰箱備用。
　　4.心臟超聲檢查:于術(shù)前、術(shù)后1小時(shí)、6小時(shí)、12小時(shí)、24小時(shí)、3天、1周行心超檢查，測量左室舒張末內(nèi)徑(LVEDd)、左室收縮末內(nèi)徑(LVEDs)、左室射血分?jǐn)?shù)(EF)等參數(shù)。
　　5.組織學(xué)檢查:分別于術(shù)后2周、4周處死動(dòng)物取心臟，觀察其外形變化，垂直于長軸把心臟切成等厚(10mm)的心肌片，從梗死區(qū)、交界區(qū)和非梗死區(qū)取材，10％的甲醛固定石蠟包埋組織切片(5um)分別用HE(Haemat

6、oxylin and eosin)和Masson染料染色。
　　6.統(tǒng)計(jì)分析:實(shí)驗(yàn)計(jì)量資料用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差(x±s)表示，手術(shù)前后的實(shí)驗(yàn)室檢查指標(biāo)及心功能指標(biāo)采用配對t檢驗(yàn)，應(yīng)用SPSS19.0統(tǒng)計(jì)軟件，P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　結(jié)果:
　　1Beagle犬心梗模型的建立:全部Beagle犬均行冠狀動(dòng)脈造影成功，未行右冠狀動(dòng)脈造影，栓塞后30min、1h、6h復(fù)查冠脈造影提示LAD中斷端全閉，無血流通過，6h

7、復(fù)查造影提示近端血流再通，LAD第二對角支遠(yuǎn)端仍無血流;3天和1周后復(fù)查冠脈造影提示LAD血流再通，無明顯狹窄。2只因術(shù)中慢心率度房室傳導(dǎo)阻滯死亡，4只術(shù)中室速、室顫發(fā)作，3只死亡?？偟氖中g(shù)成功率83.3％，術(shù)中死亡率為16.7％，術(shù)后24 h內(nèi)死亡7只，術(shù)后2周內(nèi)死亡9只(30％)，2周的存活率為70％。
　　2.心電圖檢查:術(shù)前正常心電圖，犬的12導(dǎo)聯(lián)體表心電圖可見心電圖所有導(dǎo)聯(lián)的ST—T段均在基線水平，犬左冠狀動(dòng)脈前降支被堵

8、塞后的12導(dǎo)聯(lián)體表心電圖中可見胸前導(dǎo)聯(lián)V2—V6的ST段明顯抬高呈“墓碑”狀。肢體導(dǎo)聯(lián)上可見I、aVL導(dǎo)聯(lián)ST—T壓輕度抬高，其Il、IIl、aVF導(dǎo)聯(lián)ST—T段無明顯抬高。
　　3.心臟超聲資料:術(shù)前心臟超聲檢查示心臟收縮舒張功能及各階段運(yùn)動(dòng)正常，LVEDd、LVEDs和EF等數(shù)值組內(nèi)差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義;術(shù)后1小時(shí)檢查提示心臟前壁心尖部、室間隔前1/3收縮減弱，EF值明顯下降。術(shù)后1周示左室前壁出現(xiàn)節(jié)段性運(yùn)動(dòng)減弱及反向運(yùn)動(dòng)，LVD

9、d增大，EF值恢復(fù)正常范圍。
　　4.組織形態(tài)學(xué)檢查:取出心臟后，可見梗死灶位于室間溝周圍，表面蒼白，局部心肌變硬，室壁變薄，以前壁心尖部最明顯。心臟切片上見心室前壁及室間隔前1/3有透壁性梗死。組織切片HE染色，見梗死區(qū)肌絲斷裂，間質(zhì)結(jié)構(gòu)破壞、纖維組織增生，散在分布內(nèi)有炎癥細(xì)胞浸潤，遠(yuǎn)端管腔內(nèi)存在白色微栓塞球，栓子處血管內(nèi)膜增生。Masson染色顯示:梗死區(qū)纖維呈團(tuán)片狀廣泛分布，交界區(qū)也有較多纖維形成，而正常心肌組織無纖維形成。