果糖-1,6-二磷酸酶在肝癌中的表達及其調(diào)控機制.pdf

1、目的：
　　檢測果糖-1,6-二磷酸酶(FBP1)在肝癌中的表達，分析其與患者預(yù)后的關(guān)系。探討組蛋白去乙酰化酶(HDAC)對FBP1缺失的調(diào)控機制，及FBP1對肝臟腫瘤細胞生物學(xué)行為的影響。
　　方法：
　　通過免疫組織化學(xué)染色法檢測90例肝癌患者腫瘤組織及相應(yīng)的癌旁組織中FBP1的表達。采用配對秩和檢驗比較肝癌組織與癌旁組織中 FBP1的表達水平，Kaplan-Meier法和Log-rank檢驗分析FBP1表達水平與

2、患者生存期的關(guān)系。為進一步探討肝癌中FBP1的調(diào)控機制采用HDAC抑制劑NaBu、SAHA、LBH按濃度梯度處理HepG2及SK-Hep1細胞，western blot及real-time PCR檢測FBP1蛋白及mRNA水平的變化。利用siRNA轉(zhuǎn)染實驗敲除肝癌細胞株中HDAC1及HDAC2，并檢測其對 FBP1表達的影響。染色質(zhì)免疫共沉淀實驗檢測 HDAC與 FBP1的結(jié)合位點。90例臨床組織標本同時經(jīng)免疫組化檢測 FBP1、HDA

3、C1及 HDAC2，并分析其相關(guān)性。HepG2及SK-Hep1細胞經(jīng)病毒感染，分別構(gòu)建穩(wěn)轉(zhuǎn)pcDNA3.1，pLenti6.3/FBP1，NS shRNA，F(xiàn)BP1 shRNA的穩(wěn)轉(zhuǎn)細胞株。葡萄糖檢測試劑盒檢測轉(zhuǎn)染后細胞對葡萄糖消耗的變化。MTS檢測肝癌細胞株過表達FBP1對細胞增殖的影響。免疫缺陷小鼠荷瘤實驗檢測FBP1過表達對腫瘤增殖的影響。
　　結(jié)果：
　　FBP1在肝癌組織中的表達明顯低于相應(yīng)的癌旁組織，差異有統(tǒng)計學(xué)

4、意義(Z=7.952，P＜0.001)。小肝癌中FBP1的表達水平高于非小肝癌(P=0.005)。AJCC分期越高，F(xiàn)BP1表達越低(P=0.001)。FBP1高表達組患者平均生存期為50.17個月，低表達組患者平均生存期為34.88個月，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P=0.034)。肝癌細胞株經(jīng)HDAC抑制劑NaBu、SAHA、LBH處理后，F(xiàn)BP1蛋白及mRNA水平明顯升高，并且具有藥物濃度依賴性。單獨干擾肝癌細胞株中HDAC1及HDAC2后

5、可上調(diào)FBP1的蛋白及mRNA水平，共同敲除HDAC1及HDAC2后FBP1上調(diào)更顯著。HDAC通過與FBP1增強子區(qū)AcH3K27位點結(jié)合，影響FBP1的轉(zhuǎn)錄。90例臨床標本免疫組化檢測結(jié)果也提示FBP1與HDAC1及HDAC2的表達均呈負相關(guān)(r=-0.64，P＜0.05；r=-0.61，P＜0.05)?；謴?fù)肝癌細胞中FBP1的表達，可減低腫瘤細胞對葡萄糖的消耗，抑制腫瘤細胞增殖，抑制腫瘤細胞在免疫缺陷小鼠皮下成瘤。
　　結(jié)論