端粒復合體在早發(fā)冠心病患者中作用機制研究.pdf

1、多項研究提示冠心病患者較正常對照外周血白細胞端粒長度縮短。端粒復合體，包括端粒DNA、端粒相關蛋白、端粒酶，其中端粒相關蛋白對于端粒DNA起保護作用。TRF1、TRF2、POT1直接和端粒DNA結合，可能對于端粒長度的變化起到更關鍵作用。
　　目的:
　　(1)探究早發(fā)冠心病患者及冠造陰性人群外周血白細胞中TRF1、TRF2、POT1蛋白表達水平及端粒長度的差異，及與臨床特點的關系。
　　(2)探究早發(fā)冠心病患者及冠造

2、陰性組外周血單個核細胞及粒細胞兩種不同細胞的端粒相關蛋白的表達水平及端粒長度差異，探究早發(fā)冠心病的外周血白細胞的特點。
　　(3)培養(yǎng)早發(fā)冠心病患者單核巨噬細胞，初步探究危險因素作用前后其端粒長度及端粒相關蛋白的動態(tài)變化。
　　方法:
　　(1)第一部分納入52例PCAD患者及42例冠造陰性對照，所有患者均在北京協(xié)和醫(yī)院行冠狀動脈造影明確診斷，造影前留取動脈全血提取DNA及RNA，測定外周血白細胞端粒DNA長度和三種端

3、粒相關蛋白的表達水平。
　　(2)第二部分納入36例PCAD患者及10例冠造陰性對照，取動脈全血，通過密度梯度離心法分離外周血PBMC細胞，剩余細胞裂解紅細胞后獲取粒細胞，從中提取DNA及RNA，分別測定這兩種細胞端粒DNA長度和端粒相關蛋白的表達水平差異。
　　(3)第三部分納入6例PCAD患者及3例冠造陰性對照，取動脈全血，通過密度梯度離心法分離外周血PBMC細胞，培養(yǎng)后經(jīng)貼壁的方法分離單核細胞，PMA刺激48小時誘導細

4、胞巨噬化，用空白培養(yǎng)基、50 ug/ml ox-LDL+10-3mol/L尼古丁、10 ug/ml oxLDL、50 ug/ml ox-LDL、10-6mol/L尼古丁、10-3mol/L尼古丁六種不同處理，收獲24小時、72小時細胞，測定端粒DNA長度和三種端粒相關蛋白的表達水平。
　　結果:
　　(1)第一部分結果說明PCAD患者較冠造陰性這端粒長度更短（5.19±0.53KB vs6.24±2.54 KB），具有顯著性

5、差異(P=0.011)。研究還發(fā)現(xiàn)，PCAD組患者TRF1表達量較冠造陰性組更低（0.03±0.88 vs0.44±0.78，P=0.024），POT1表達量更高（-0.64±0.84 vs-1.27±0.91，P=0.001），差異均具有顯著性;兩組TRF2表達量未見明顯差異。POT1的表達量和年齡呈負相關關系，POT1表達量=-0.024×年齡+0.280(r2=0.047，P=0.044)。TRF1、TRF2、POT1表達量間具有

6、顯著相關性，除此之外，TRF1表達量還與高脂血癥顯著負相關(P=0.022)，POT1與白細胞中性粒細胞比例顯著正相關(P=0.003)。
　　(2)第二部分結果說明全體入選者中，粒細胞比PBMC細胞的端粒長度DNA相對更短(差值為(-0.67±2.14) KB，P=0.041)，TRF1、TRF2、POT1的表達量相對更高，粒細胞和PBMC細胞的差值和P值分別為0.55±1.05，P=0.002;0.74±0.90，P=0.00

7、0;0.98±1.09，P=0.000。粒細胞及PBMC細胞的各種端粒相關蛋白的表達水平呈顯著正相關性（P值分別為0.011，0.002，0.000），兩種細胞的端粒長度相關性則不顯著。冠造陰性組中，粒細胞比PBMC細胞的端粒長度顯著更短，差值為(-1.43±1.28) KB;P=0.010;而在PCAD人群中，兩者的端粒長度沒有明顯差異。
　　(3)第三部分結果顯示人外周血單核巨噬細胞在不同危險因素刺激下培養(yǎng)72小時端粒未見明顯

8、改變(P=0.226);在受到不同刺激時，PCAD組TRF2、POT1表達較冠造陰性組顯著增加（差值和P值分別為0.002，0.000），TRF1則無顯著差異(P=0.133);不同培養(yǎng)時間TRF1、TRF2、POT1表達量無顯著性差異(P值分別為0.126，0.730，0.389);在冠造陰性組當中，10 ug/mloxLDL及10-6mol/L尼古丁有抑制TRF1、TRF2、POT1表達的趨勢，而50 ug/ml oxLDL、10-

9、3mol/L尼古丁有促進TRF1、TRF2、POT1表達的趨勢;PCAD組中情況類似，10 ug/mloxLDL有促進TRF2表達趨勢;10-6mol/L尼古丁有促進POT1表達趨勢;50 ug/ml oxLDL、10-3mol/L尼古丁及兩者混合的作用差異不顯著。
　　結論:
　　(1)TRF1表達水平降低、POT1表達水平增高與PCAD的疾病進程有一定相關性;POT1可能是衰老的潛在生物學標記物;高脂血癥可能通過降低TR

10、F1水平誘發(fā)動脈粥樣硬化的過程，中性粒細胞的升高可能通過升高POT1參與早發(fā)冠心病的疾病過程。
　　(2)PCAD患者較之普通冠心病患者在發(fā)病過程中，粒細胞可能起到更重要作用。
　　(3)人單核巨噬細胞危險因素刺激體外培養(yǎng)72小時端粒長度無顯著變化;受到不同危險因素刺激，PCAD組TRF2、POT1表達較冠造陰性顯著增加;較低水平危險因素刺激即可誘導PCAD組TRF2、POT1的增加，顯示出其易感性。較大劑量危險因素刺激可能