致病桿菌中SrfABC類毒素生物活性研究.pdf

1、分類號(hào)Q窆三窆：窆學(xué)校代碼!Q主壘2密級(jí)學(xué)號(hào)2Q12Q21壘!123致病桿菌中SrfABC類毒素生物活性研究BiologicalactivitystudyofSrfABCtoxinfromXenorhabdus指導(dǎo)教師姓名、職稱塑照插型鏨撞湖南師范大學(xué)學(xué)位評(píng)定委員會(huì)辦公室二。一五年五月接下來(lái)，我ff]PCR擴(kuò)增YsrfABC全長(zhǎng)基因并在Ecoli中異源表達(dá)，提取全蛋白進(jìn)行細(xì)胞毒性測(cè)定，實(shí)驗(yàn)結(jié)果證實(shí)：表達(dá)了SrfABC毒素的菌體全蛋白對(duì)C

2、F203／25具有很高的細(xì)胞毒性。激光共聚焦顯微鏡下觀察發(fā)現(xiàn)：低濃度下，SrfABC毒素處理后的CF203／25細(xì)胞中有完整的細(xì)胞骨架，但細(xì)胞核皺縮、線粒體消失；而高濃度下，毒素處理后的細(xì)胞核凝聚，細(xì)胞骨架解聚，線粒體消失。綜合以上實(shí)驗(yàn)結(jié)果，我們推測(cè)：Sr￡蛆C毒素可能作用靶點(diǎn)為細(xì)胞的線粒體。DNALadder實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)：與對(duì)照組相比，經(jīng)SrfABC毒素處理的實(shí)驗(yàn)組中的DNA出現(xiàn)了成倍降解條帶，暗示該毒素可能引起細(xì)胞凋亡，具體機(jī)制有待進(jìn)一

3、步研究和證實(shí)。本研究還構(gòu)建了SrfA，Sr毋，SrfC三組分單獨(dú)表達(dá)載體。經(jīng)IPTG誘導(dǎo)、純化、脫鹽后的三種目的蛋白分別作用CF203／25細(xì)胞，其中SrfA單獨(dú)作用時(shí)，在低濃度下就具有很高的細(xì)胞毒性，而Srfl3和SrfC組分只有在高濃度下才能抑制細(xì)胞增殖，我們推測(cè)：SrfA組分是毒素復(fù)合物中的酶活性組分，而SrfB和SrfC是輔助組分。本研究為進(jìn)一步研究SrfABC毒素的作用機(jī)制，明確SrfABC毒素在致病桿菌菌株中抵抗宿主防御、發(fā)