SALL4調(diào)控CD44在胃癌中的作用和機制研究.pdf

1、目的：探討人婆羅雙樹樣基因4（spalt-like transcription factor4, SALL4）在胃癌生長和轉移中的作用，揭示SALL4調(diào)控CD44的作用及機制，為闡明SALL4促癌作用提供理論基礎和實驗依據(jù)，并為胃癌分子診斷和治療提供新的靶點。
　　方法：采用慢病毒介導shRNA基因干擾或四環(huán)素誘導shRNA基因干擾人胃癌 MGC-803細胞 SALL4表達，采用實時熒光定量 PCR和Western blot檢測干

2、擾效率；生長曲線和平板克隆形成實驗檢測細胞增殖能力；劃痕實驗和Transwell遷移實驗檢測細胞運動和遷移能力。采用實時熒光定量PCR和Western blot檢測SALL4基因干擾對干性相關基因表達以及信號通路活化的影響。雙熒光素酶報告基因分析SALL4對CD44啟動子活性影響；染色質(zhì)免疫共沉淀實驗（chromatin immunoprecipitation, ChIP）檢測SALL4蛋白與CD44啟動子區(qū)域結合情況。采用生長曲線、平

3、板克隆形成實驗、劃痕實驗、Transwell遷移實驗以及裸鼠皮下荷瘤實驗評價CD44回補對shRNA基因干擾SALL4胃癌細胞生長和轉移的影響。
　　結果：實時熒光定量PCR及Western blot結果表明shRNA直接干擾或四環(huán)素誘導shRNA基因干擾均可有效降低MGC-803細胞SALL4表達；SALL4基因干擾導致胃癌細胞增殖能力和遷移能力降低。SALL4基因減低可顯著抑制干性分子 Oct4、Sox2、Nanog、c-My

4、c和 CD44基因及蛋白表達，并且可抑制 ERK1/2、NF-κB和 STAT3信號通路活化。雙熒光素酶報告基因檢測結果表明，基因干擾SALL4抑制CD44啟動子活性。ChIP實驗結果表明，SALL4蛋白結合CD44啟動子區(qū)-505 bp~-305 bp區(qū)域。CD44回補可逆轉SALL4基因干擾引起的胃癌細胞體外增殖和遷移能力抑制以及體內(nèi)腫瘤生長抑制。
　　結論：SALL4通過上調(diào)CD44促進胃癌細胞體外增殖、遷移和體內(nèi)致瘤能力。