擬異小桿屬新種RG081015及其共生菌DR186和R187的分類鑒定.pdf

1、昆蟲病原線蟲(Entomopathogenic nematodes,EPN)是一種對(duì)農(nóng)業(yè)害蟲有致病性的線蟲,現(xiàn)在已經(jīng)作為一種成熟的生物防治因子商業(yè)化應(yīng)用于對(duì)農(nóng)業(yè)害蟲的防治并獲得成功。已描述的昆蟲病原線蟲隸屬于動(dòng)物界,線蟲動(dòng)物門(Nematoda),側(cè)尾腺綱(Secementea),小桿目(Rhabditida)。包括斯氏科(Steinernematidae)斯氏線蟲屬(Steinernema)和新斯氏線蟲屬(Neosteinernema

2、),異小桿科(Heterorhabditidae)異小桿屬(Heterorhabditis)以及小桿科(Rhabditidae)擬異小桿線蟲屬(Heterorhabditidoides);在其腸道內(nèi)分別與腸桿菌科(Enterobacteriaceae)的致病桿菌屬(Xenorhabdus)細(xì)菌、發(fā)光桿菌屬(Photorhabdus)細(xì)菌以及沙雷氏屬(Serratia)細(xì)菌共生。
　　 利用大蠟螟幼蟲誘捕的方法從江蘇省如皋市菜園土

3、樣中分離到一個(gè)昆蟲病原線蟲新品系,標(biāo)記為RG081015。雄成蟲:體長=1299.65(1143.00-1474.49)μm;D=66.6(20-51.09)μm;ES=19.53(15.05-25.74)μm;交合刺長度=49.23(35.24-60.93)μm;粘液囊蝴蝶狀,上面有9對(duì)生殖乳突,排列方式為1、2、3、3,在雄蟲末端的排列方式及數(shù)目不變;交合刺一對(duì),對(duì)稱分開。雌成蟲:體長=1401.36(1117-1588)μm;D％

4、=941.89(787-1105)μm;體表有4條明顯的側(cè)線,陰門裸露。侵染期線蟲:體長=622.01(390-863)μm;EP=160.89(135-200)μm;帶鞘尾長=90.69(70-107)μm;D%=859.13(815.5-901.1)μm;E%=25.83(23.49-28.5)。該線蟲形態(tài)學(xué)特征和崇明擬異小桿線蟲相似,但也有差異明顯,雄蟲唇部縊縮而線蟲RG081015不明顯,咽部有一個(gè)突起,口腔壁角質(zhì)化明顯,RG0

5、81015成蟲的身體長度更長(較崇明擬異小桿線蟲長184μm),RG081015較崇明擬異小桿線蟲DZ0503CMFT口腔長度更長而直徑更窄,RG081015的排泄孔更靠近身體前部,RG081015成蟲的尾長明顯更長,RG081015交合刺較DZ0503CMFT更發(fā)達(dá)等。將兩種線蟲的18S rDNA和ITS rDNA基因進(jìn)行比對(duì),發(fā)現(xiàn)他們的18S rDNA基因序列有2個(gè)堿基的差異,同源性99%,ITS序列有12個(gè)堿基差異,同源性98%,

6、系統(tǒng)發(fā)育分析表明RG081015與崇明擬異小桿線蟲DZ0503CMFT處在同一進(jìn)化枝,應(yīng)該是同屬線蟲。通過雜交實(shí)驗(yàn)證明線蟲RG081015與崇明擬異小桿線蟲存在生殖隔離,進(jìn)一步表明他們是兩種不同的線蟲。
　　 抽取被線蟲RG081015侵染的大蠟螟血淋巴涂布NBTA平板,獲得66個(gè)單菌落,經(jīng)鑒定其中2株殺蟲活性較強(qiáng)的菌株為線蟲共生菌,該2株菌在營養(yǎng)瓊脂上可以產(chǎn)生紅色素,革蘭氏染色反應(yīng)呈陰性,標(biāo)記為DR186與R187。對(duì)其16S

7、 rDNA和rpoB基因克隆測序、比對(duì)后構(gòu)建進(jìn)化樹,確定DR186和R187為沙雷氏菌屬細(xì)菌。線蟲RG081015攜帶的共生菌與崇明擬異小桿線蟲的共生菌屬于同屬細(xì)菌。與崇明擬異小桿線蟲攜帶的嗜線蟲沙雷氏菌菌株DZ0503CMFT相比,DR186、R187在精氨酸二水解酶活性、還原硝酸鹽活性、淀粉水解酶活性和吐溫80水解活性等方面存在差異,DR186、R187不能利用D-蜜二糖、淀粉,DZ0503CMFT可以,在藥敏活性方面兩種共生菌也存