中國(guó)針屬線蟲(chóng)分類(lèi)和致病性研究及半卡盧斯屬新種描述.pdf

1、針屬線蟲(chóng)（ParatylenchusMicoletzky,1922）是針科（Paratylenchidae Raski,1962）中最大的一個(gè)屬，包括100多個(gè)種，我國(guó)已報(bào)道的針屬線蟲(chóng)約有20多種。針屬線蟲(chóng)寄主廣泛，在多種農(nóng)作物、果樹(shù)、林木和草類(lèi)根際均發(fā)現(xiàn)有高密度的該屬線蟲(chóng)，有些針屬種類(lèi)已證明是寄主植物的病原物。半卡盧斯屬（HemicaloosiaRay& Das,1978）線蟲(chóng)隸屬于鞘總科（Hemicycliophoroidea Sk

2、arbilovich,1959）中的卡盧斯科（Caloosiinae Siddiqi,1980），目前共有9個(gè)有效種，但我國(guó)并未有該屬線蟲(chóng)的報(bào)道。本研究采集了我國(guó)多個(gè)省份的植物根際土壤樣品，主要對(duì)其中的針屬線蟲(chóng)進(jìn)行了分離鑒定，共確定了針屬線蟲(chóng)的16個(gè)種，其中4個(gè)為針屬線蟲(chóng)新種，6個(gè)為針屬線蟲(chóng)的中國(guó)新紀(jì)錄種，在此基礎(chǔ)上對(duì)針屬線蟲(chóng)相關(guān)種類(lèi)和鑒定特征進(jìn)行了修訂，同時(shí)發(fā)現(xiàn)和證實(shí)了一個(gè)由深圳針線蟲(chóng)新種引起的紅掌新病害—紅掌慢速衰退病，此外，發(fā)現(xiàn)并

3、描述了一個(gè)半卡盧斯屬線蟲(chóng)新種。具體研究結(jié)果如下：
　　1.從重慶市麥冬草根和根際土壤分離并鑒定針屬線蟲(chóng)一新種：重慶針線蟲(chóng)新種（Paratylenchus chongqingensisn.sp.）。該針線蟲(chóng)的形態(tài)特征如下：雌蟲(chóng)體長(zhǎng)為262(243–274.5)μm，口針長(zhǎng)為23(21–24.5)μm，側(cè)線3條，唇區(qū)縊縮，略呈盤(pán)狀，陰門(mén)側(cè)膜大，尾端尖圓；雄蟲(chóng)頭前端略圓，口針和食道腺退化，有短的交合刺管，尾末端呈短絲狀。本研究還獲得了3

4、條重慶針線蟲(chóng)新種的ITS-rDNA序列，序列長(zhǎng)度均為990 bp。重慶針線蟲(chóng)新種的ITS序列的種內(nèi)變異為2–6 bp（0.2–0.6％）。
　　2.從廣東省廣州市的竹子根和根際土壤分離并鑒定針屬線蟲(chóng)一新種：廣州針線蟲(chóng)新種（Paratylenchus guangzhouensisn.sp.）。該新種的形態(tài)特征如下：雌蟲(chóng)體長(zhǎng)為233(217–247)μm，口針長(zhǎng)為47(43–49.5)μm，側(cè)線3條，頭部圓，不縊縮，側(cè)器口呈蝴蝶結(jié)狀，

5、陰門(mén)側(cè)膜小，不明顯，尾端細(xì)圓到鈍圓；雄蟲(chóng)頭部圓，口針和食道腺退化，有短的交合刺管，尾端略尖；4齡幼蟲(chóng)有口針。本研究還獲得了2條廣州針線蟲(chóng)新種的ITS-rDNA序列，序列長(zhǎng)度分別為1034 bp、1035 bp，2條序列間差異為1 bp；獲得3條28S rDNA D2-D3區(qū)序列，序列長(zhǎng)均為771bp，且3條序列間變異為0bp。
　　3.從江蘇省南京市的馬尾松根和根際土壤分離并鑒定針屬線蟲(chóng)一新種：南京針線蟲(chóng)新種（Paratylenc

6、hus nanjingensisn.sp.）。該新種的形態(tài)特征如下：雌蟲(chóng)體長(zhǎng)為259(243–279)μm，口針長(zhǎng)為66(64–68)μm，側(cè)線4條，頭不縊縮，有略突出的亞中唇結(jié)構(gòu)，排泄孔位于口針基部球水平位置以前，有小的但明顯的陰門(mén)側(cè)膜，尾端細(xì)圓或亞尖；雄蟲(chóng)頭截錐形，口針及食道腺退化，交合刺管短，尾端略尖。本研究獲得了3條南京針線蟲(chóng)新種的ITS-rDNA序列，序列長(zhǎng)度為1032 bp，3條序列間的差異為0–2 bp；獲得2條28S r

7、DNAD2-D3區(qū)序列，序列長(zhǎng)度均為771bp，且2條序列間無(wú)差異，相似度為100%。
　　4.從廣東省深圳市的紅掌根和根際土壤分離檢測(cè)到高密度的針屬線蟲(chóng)，經(jīng)鑒定該線蟲(chóng)為一針屬線蟲(chóng)新種，命名為深圳針線蟲(chóng)新種（Paratylenchus shenzhenensisn.sp.）。該新種的形態(tài)特征如下：雌蟲(chóng)體長(zhǎng)為275(249–302)μm，口針長(zhǎng)為19(17–21)μm，側(cè)線4條，頭部圓，不縊縮，有4個(gè)亞中唇瓣，側(cè)唇小，口孔附近略凹陷

8、，有明顯的陰門(mén)側(cè)膜，尾端細(xì)圓或略呈指狀；雄蟲(chóng)在泄殖腔口前向腹面彎曲，從泄殖腔口后向背面彎曲；口針和食道腺退化；有明顯的交合刺管；幼蟲(chóng)有口針。本研究還獲得了16條深圳針線蟲(chóng)的ITS序列，序列長(zhǎng)度為1047–1049 bp，序列間差異為0–33 bp；獲得9條28S rDNA的D2-D3區(qū)序列，序列間差異為0–6 bp。運(yùn)用柯赫氏法則研究證明，深圳針線蟲(chóng)侵染紅掌根系導(dǎo)致一種新病害—紅掌慢速衰退病，受害紅掌表現(xiàn)為生長(zhǎng)發(fā)育不良，根通常呈現(xiàn)褐色，

9、深褐色或黑色病斑。本研究建立了使用胡蘿卜愈傷組織培養(yǎng)繁殖深圳針線蟲(chóng)的方法，確定了該線蟲(chóng)在胡蘿卜愈傷組織上的最適培養(yǎng)溫度為25 ℃。
　　5.鑒定描述了6個(gè)針屬線蟲(chóng)的中國(guó)新紀(jì)錄種，分別為：具緣針線蟲(chóng)（P.costatus）、盤(pán)唇針線蟲(chóng)（P.discocephalus）、長(zhǎng)尾針線蟲(chóng)（P.longicaudatus）、鋸尾針線蟲(chóng)（P.serricaudatus）、變化針線蟲(chóng)（P.variabilis）和變異針線蟲(chóng)（P.variatus）

10、。并提出錨針線蟲(chóng)和具緣針線蟲(chóng)可能是艾達(dá)利摩斯針線蟲(chóng)的同物異名；胚軸針線蟲(chóng)（P.epicotylus）可能是盤(pán)唇針線蟲(chóng)的同物異名；變異針線蟲(chóng)和水生針線蟲(chóng)應(yīng)是兩個(gè)有效種。
　　6.從廣東省廣州市木荷根和根際土壤采集分離并鑒定半卡盧斯屬線蟲(chóng)一新種：廣州半卡盧斯線蟲(chóng)新種（Hemicaloosia guangzhouensisn.sp.）。該新種的形態(tài)特征為：雌蟲(chóng)體長(zhǎng)為906(798–961)μm，體環(huán)數(shù)為298(282–313)，口針長(zhǎng)6

11、5.5(59–69)μm，蟲(chóng)體外側(cè)覆蓋一層膜狀體鞘，側(cè)區(qū)有一條縱線，受精囊中無(wú)精子，尾長(zhǎng)130(115–145)μm，陰門(mén)到尾端體環(huán)數(shù)為63(58–69)；肛門(mén)到尾端體環(huán)數(shù)為53(49–59)；陰門(mén)和肛門(mén)間體環(huán)數(shù)為9(7–11)；雄蟲(chóng)未知。本研究獲得了2條廣州半卡盧斯線蟲(chóng)新種的ITS-rDNA序列，序列長(zhǎng)度均為805 bp，序列的差異為0 bp；獲得2條28S-rDNA的D2-D3區(qū)序列，序列長(zhǎng)度均為769 bp，序列間差異為1bp；獲

12、得2條18S-rDNA序列，序列長(zhǎng)度為882 bp，序列間差異為1 bp。采用六種限制性內(nèi)切酶分別對(duì)廣州半卡盧斯線蟲(chóng)新種ITS rDNA的PCR純化產(chǎn)物進(jìn)行酶切反應(yīng)，酶切片段大小分別為：AvaI-805bp；Bsh1236I-805bp；DraI-805 bp；HinfI-625，132，48 bp；Hin6I-586，130，78，11 bp；MspI-424，303，78 bp。
　　7.本研究分別采用ITS-rDNA序列和2