動(dòng)力相關(guān)蛋白1(Drp1)激活對膿毒癥心肌細(xì)胞轉(zhuǎn)化為促炎癥狀態(tài)的影響.pdf

1、背景：膿毒癥(Sepsis)是機(jī)體對嚴(yán)重感染的全身性過度炎癥反應(yīng)綜合征(Systemic Inflammatory Response Syndrome,SIRS)所導(dǎo)致的可以威脅生命的多臟器功能不全綜合征（Multiple Organ Dysfunction Syndrome, MODS)，已成為臨床主要死亡原因之一。膿毒癥時(shí)會發(fā)生心功能不全，其原因之一是心肌細(xì)胞轉(zhuǎn)化為促炎癥狀態(tài)。動(dòng)力相關(guān)蛋白1（Dynamin-related prot

2、ein1，Drp1）是一種介導(dǎo)線粒體分裂的蛋白，目前未見關(guān)于Drp1在膿毒癥中對心肌細(xì)胞轉(zhuǎn)化為促炎癥狀態(tài)影響的相關(guān)研究。
　　目的：探索動(dòng)力相關(guān)蛋白1在膿毒癥心肌細(xì)胞轉(zhuǎn)化為促炎癥狀態(tài)中的作用。
　　方法：動(dòng)物研究：取12只3-4月齡SD大鼠（雌雄不拘），隨機(jī)分為3組。以3 g/kg的劑量向大鼠腹腔注射大鼠盲腸內(nèi)容物（180 mg/mL）制備膿毒癥模型；對照組大鼠腹腔注射（i.p.）生理鹽水；抑制劑組接受線粒體分裂抑制劑（Md

3、ivi-1，25 mg/kg，i.p.）預(yù)處理1 h后腹腔注射盲腸內(nèi)容物。6 h后觀察大鼠心肌組織切片白細(xì)胞浸潤程度并采用酶聯(lián)免疫吸附法（ Enzyme Linked Immunosorbent Assay,ELISA）測定心肌組織髓過氧化物酶（Myeloperoxidase，MPO）活性。并收集對照組、膿毒癥大鼠血漿用于刺激心肌細(xì)胞。細(xì)胞研究：使用膿毒癥及對照組血漿刺激相應(yīng)組乳鼠心肌細(xì)胞，抑制劑組則先接受Mdivi-1（10μmol/

4、L）預(yù)處理1h后接受膿毒癥大鼠血漿刺激。分別采用實(shí)時(shí)熒光定量聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)（Real Time Polymerase Chain Reaction，RT-PCR）和酶聯(lián)免疫吸附法分別檢測脂多糖誘導(dǎo)趨化因子(LPS-induced CXC Chemokine, LIX)以及角質(zhì)細(xì)胞起源趨化因子（Keratinocyte-derived Chemokine, KC) mRNA及蛋白的表達(dá)與釋放。免疫蛋白印跡法（Western Blottin

5、g,WB）檢測膿毒癥大鼠血漿刺激后Drp1在絲氨酸637（Serine637）位點(diǎn)的去磷酸化程度及其向線粒體的遷移情況。
　　結(jié)果：研究顯示膿毒癥大鼠心肌間質(zhì)白細(xì)胞較對照組浸潤增加且MPO活性顯著升高（P<0.05）；Drp1抑制劑（Mdivi-1，25mg/kg）預(yù)處理可顯著減少膿毒癥大鼠心肌間質(zhì)白細(xì)胞浸潤程度（P<0.05）并明顯降低 MPO活性（P<0.05）。膿毒癥血漿刺激心肌細(xì)胞引起趨化因子（LIX、KC）較對照組表達(dá)、

6、釋放增加（P<0.05）。Mdivi-1（10μmol/L）預(yù)處理心肌細(xì)胞可顯著抑制膿毒癥大鼠血漿刺激的心肌細(xì)胞趨化因子表達(dá)及釋放（P<0.05）。膿毒癥大鼠血漿刺激心肌細(xì)胞可導(dǎo)致 Drp1于S637位點(diǎn)顯著去磷酸化（P<0.05），以及Drp1由胞質(zhì)遷移至線粒體（P<0.05），而Mdivi-1（10μmol/L）預(yù)處理可抑制Drp1在S637位點(diǎn)的去磷酸化（P<0.05），以及Drp1由胞質(zhì)至線粒體的遷移（P<0.05）。