子宮肌瘤中MED12基因突變的研究.pdf

1、背景與目的：
　　子宮肌瘤是婦科常見的良性腫瘤，子宮肌瘤最主要的臨床表現(xiàn)是異常子宮出血、盆腔痛和貧血，其對(duì)女性生活質(zhì)量的影響不容忽視。國外有研究報(bào)道子宮肌瘤中中介體復(fù)合物亞基12（Mediator complex subunit12，MED12）基因的高頻突變，其中約70％的子宮肌瘤患者病灶組織中存在該基因突變，且大部分（>90%）位于MED12基因的第44位甘氨酸（MED12 p.G44）。本研究為了確定子宮肌瘤患者的MED12

2、基因突變譜，對(duì)MED12好發(fā)突變的區(qū)域進(jìn)行大規(guī)模測序；并且構(gòu)建MED12基因野生型和突變型質(zhì)粒，通過轉(zhuǎn)染至293T細(xì)胞，繼而檢測293T細(xì)胞的活力、侵襲、遷移、凋亡及周期情況，在細(xì)胞水平上探索MED12基因突變對(duì)子宮肌瘤的發(fā)生發(fā)展的影響。
　　方法：
　　首先從322名單、多發(fā)性子宮肌瘤患者中收取362個(gè)肌瘤樣本，提取子宮肌瘤組織總DNA，進(jìn)行PCR擴(kuò)增，然后進(jìn)行測序、序列比對(duì)，找出潛在突變。然后構(gòu)建pCMV6-hMED12

3、-DDK質(zhì)粒，并將質(zhì)粒轉(zhuǎn)染至293T細(xì)胞。分為4組：①空載質(zhì)粒，②空白細(xì)胞，③MED12突變型，④野生型，使用Western blotting（WB）檢測MED12蛋白的表達(dá)；CCK8法檢測細(xì)胞活力；Transwell檢測細(xì)胞遷移和侵襲；流式細(xì)胞法檢測細(xì)胞的凋亡水平；PI染色法檢測細(xì)胞周期。
　　結(jié)果：
　　通過測序證明子宮肌瘤患者的362個(gè)樣本中，158例 MED12突變(43.6%)；第44位甘氨酸(G)突變?yōu)樘於彼?

4、D)的比例最高（18.5%）。本研究中并未發(fā)現(xiàn)MED12L的突變。MED12的突變與各項(xiàng)臨床特征無相關(guān)。利用CCK8法檢測發(fā)現(xiàn)MED12的突變型（G44D）能夠提高293T細(xì)胞活力，且有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P＜0.01），然而細(xì)胞凋亡及細(xì)胞周期并無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。
　　結(jié)論：
　　1.本研究中發(fā)現(xiàn)子宮肌瘤中存在高頻率的 MED12基因突變（43.6%，158/362），MED12突變較少發(fā)生于相鄰的子宮肌層。此外并未發(fā)現(xiàn)子宮肌瘤患者中存