載脂蛋白M增加小鼠脾臟CD4+T淋巴細(xì)胞的儲(chǔ)備及其可能機(jī)制.pdf

1、一、載脂蛋白M增加小鼠脾臟CD4+T淋巴細(xì)胞的儲(chǔ)備
　　目的：利用載脂蛋白M（Apolipoprotein M，ApoM）基因敲除（ApoM-/-）小鼠和ApoM野生型（ApoM+/+）小鼠的動(dòng)物模型，采用腹腔注射脂多糖（Lipopolysaccharide，LPS）的實(shí)驗(yàn)方法，研究ApoM基因敲除對(duì)LPS誘導(dǎo)小鼠脾臟組織中CD3+T淋巴細(xì)胞，以及CD4+和CD8+T淋巴細(xì)胞亞群的影響。
　　方法：健康6-8周、雄性、SPF

2、級(jí)的ApoM+/+和ApoM-/-小鼠，隨機(jī)分成對(duì)照組、低劑量組和高劑量組，每組6只；每只小鼠按照對(duì)照組、低劑量組和高劑量組經(jīng)腹腔分別注射100μl等體積0.9％生理鹽水、5mg/kg或者10mg/kg的LPS溶液，連續(xù)3日，每天上午進(jìn)行注射，于第4天進(jìn)行取材；采用流式細(xì)胞技術(shù)分析小鼠脾臟組織中所含的CD3+、CD4+、CD8+T淋巴細(xì)胞的構(gòu)成及比例。
　　結(jié)果：LPS刺激后，ApoM+/+和ApoM-/-兩組小鼠脾臟組織中CD3

3、+T淋巴細(xì)胞的百分?jǐn)?shù)均較對(duì)照組顯著降低（P<0.01和P<0.001）。然而，ApoM+/+和ApoM-/-兩組小鼠脾臟組織中的 CD3+ T淋巴細(xì)胞百分?jǐn)?shù)，在對(duì)照組和 LPS刺激后均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P>0.05）。正常對(duì)照組ApoM-/-小鼠脾臟組織中CD4+T淋巴細(xì)胞的百分?jǐn)?shù)較ApoM+/+小鼠顯著降低（P<0.01）；LPS刺激后，ApoM+/+和ApoM-/-兩組小鼠脾臟組織中CD4+T淋巴細(xì)胞百分?jǐn)?shù)均較對(duì)照組顯著降低（P<0.0

4、01和 P<0.001）。并且，5mg/kg和10mg/kg LPS刺激后ApoM-/-組小鼠脾臟組織中CD4+T淋巴細(xì)胞的百分?jǐn)?shù)均顯著低于ApoM+/+組（P<0.05和P<0.01）。對(duì)照組和 LPS刺激后，ApoM+/+和ApoM-/-兩組小鼠脾臟組織中的CD8+T淋巴細(xì)胞百分?jǐn)?shù)的變化無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P>0.05）。盡管對(duì)照組 ApoM+/+小鼠和 ApoM-/-小鼠的 CD4+/CD8+ T淋巴細(xì)胞的比值差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P=0.

5、0556），但5mg/kg和10mg/kg LPS刺激后ApoM-/-組小鼠脾臟組織中CD4+/CD8+T淋巴細(xì)胞的比值均低于ApoM+/+組（P<0.01和P<0.01）。
　　結(jié)論：載脂蛋白M增加小鼠脾臟組織中CD4+T淋巴細(xì)胞的百分?jǐn)?shù)，有利于脾臟CD4+T淋巴細(xì)胞的儲(chǔ)備，提高脾臟組織中CD4+/CD8+T淋巴細(xì)胞的比值。
　　二、載脂蛋白M維持機(jī)體的正常免疫反應(yīng)可能與其增加脾臟CD4+T淋巴細(xì)胞儲(chǔ)備有關(guān)
　　目的

6、：利用載脂蛋白M（Apolipoprotein M，ApoM）基因敲除（ApoM-/-）小鼠和ApoM野生型（ApoM+/+）小鼠的動(dòng)物模型，采用腹腔注射脂多糖（Lipopolysaccharide，LPS）的實(shí)驗(yàn)方法，測(cè)定LPS刺激前和刺激后小鼠肝臟組織中TNF-α和MCP-1基因表達(dá)水平，以及血清中TNF-α和MCP-1蛋白表達(dá)水平。
　　方法：健康6-8周、雄性、SPF級(jí)的ApoM+/+和ApoM-/-小鼠，隨機(jī)分成對(duì)照組、

7、低劑量組和高劑量組，每組6~9只；每只小鼠按照對(duì)照組、低劑量組和高劑量組經(jīng)腹腔分別注射100μl等體積0.9%生理鹽水、5mg/kg和10mg/kg的LPS溶液，連續(xù)3日，每天上午進(jìn)行注射，于第4天進(jìn)行取材；采用Real-time PCR或者Luminex xMAP液相芯片技術(shù)，測(cè)定LPS刺激前和刺激后肝臟組織中TNF-α和MCP-1基因表達(dá)水平，以及血清中TNF-α和MCP-1蛋白濃度水平。
　　結(jié)果：ApoM+/+組和ApoM

8、-/-組小鼠肝臟組織中TNF-α mRNA表達(dá)水平均較對(duì)照組顯著升高（P<0.001和 P<0.001）；同樣，ApoM+/+組和 ApoM-/-組小鼠肝臟組織中MCP-1 mRNA表達(dá)水平均較對(duì)照組顯著升高（P<0.01和P<0.001）。然而，同等劑量組間ApoM+/+組與ApoM-/-組小鼠比較，肝臟組織中TNF-α mRNA和MCP-1 mRNA的表達(dá)水平的差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）。ApoM+/+組小鼠血清TNF-α和

9、MCP-1蛋白濃度水平較對(duì)照組顯著升高（P<0.001和P<0.01）；ApoM-/-組小鼠血清TNF-α和MCP-1蛋白濃度水平較對(duì)照組顯著升高（P<0.05和P<0.05）。然而，ApoM+/+和ApoM-/-小鼠血清TNF-α蛋白濃度在對(duì)照組和低劑量組的差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05），在高劑量組ApoM-/-小鼠血清中TNF-α蛋白濃度較ApoM+/+小鼠顯著降低（P<0.01）；在對(duì)照組 ApoM-/-小鼠血清 MCP-1濃

10、度較 ApoM+/+小鼠顯著升高（P<0.05）；然而，在低劑量組和高劑量組ApoM+/+和ApoM-/-小鼠的差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）。
　　結(jié)論：載脂蛋白M可維持小鼠機(jī)體的正常免疫反應(yīng)這可能與載脂蛋白M增加脾臟T淋巴細(xì)胞的儲(chǔ)備有密切關(guān)系。
　　三、載脂蛋白M可能通過(guò)增加小鼠脾臟VE-cadherin的表達(dá)提高其CD4+T淋巴細(xì)胞的儲(chǔ)備
　　目的：利用載脂蛋白M（Apolipoprotein M，ApoM）

11、基因敲除（ApoM-/-）小鼠和ApoM野生型（ApoM+/+）小鼠的動(dòng)物模型，采用腹腔注射脂多糖（Lipopolysaccharide，LPS）的實(shí)驗(yàn)方法，進(jìn)一步測(cè)定LPS刺激前、后小鼠脾臟組織中部分粘附分子和趨化因子受體基因表達(dá)水平的變化。
　　方法：健康6-8周、雄性、SPF級(jí)的ApoM+/+和ApoM-/-小鼠，各48只隨機(jī)分成對(duì)照組、LPS注射后1h、3h、6h、12h和24h這六個(gè)時(shí)間觀察終點(diǎn)，然后腹腔注射10mg/k

12、g LPS（對(duì)照組采用腹腔注射0.9%生理鹽水），然后取材小鼠的脾臟組織，每個(gè)時(shí)間點(diǎn)8只小鼠。采用 Real-time PCR的方法，檢測(cè)各個(gè)觀察時(shí)間點(diǎn)脾臟組織中E-cadherin、VE-cadherin、S1PR1~5、CXCR3、CXCR4基因表達(dá)水平。
　　結(jié)果：腹腔注射10mg/kg LPS后，ApoM+/+和ApoM-/-小鼠脾臟組織中E-cadherin和VE-cadherin的基因表達(dá)水平均隨著時(shí)間的推移而顯著降低

13、（P<0.01和P<0.01）；在各個(gè)觀察時(shí)間終點(diǎn)，ApoM+/+和ApoM-/-小鼠脾臟組織中E-cadherin基因的表達(dá)水平無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P>0.05），然而，ApoM-/-小鼠脾臟組織中 VE-cadherin的基因表達(dá)水平在對(duì)照組、LPS注射后1h、3h、6h和12h均較ApoM+/+小鼠顯著降低（P<0.05）。ApoM+/+和ApoM-/-小鼠脾臟組織中S1PR1、S1PR3和S1PR4基因表達(dá)水平均隨著時(shí)間的推移而顯著降

14、低（P<0.01和 P<0.01）；在各個(gè)觀察時(shí)間終點(diǎn)，ApoM+/+和 ApoM-/-小鼠脾臟組織中S1PR1、S1PR2和S1PR3基因的表達(dá)水平均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P>0.05）。ApoM+/+和ApoM-/-小鼠脾臟組織中CXCR3和CXCR4的基因表達(dá)水平均隨著時(shí)間的推移而顯著降低（P<0.01和P<0.01）；在各個(gè)觀察時(shí)間終點(diǎn)，ApoM+/+和ApoM-/-小鼠脾臟組織中CXCR3和CXCR4基因的表達(dá)水平差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P