小鼠誘導(dǎo)性多能干細(xì)胞向嗅受體神經(jīng)元和僧帽-叢細(xì)胞分化的體外研究.pdf

1、研究背景：
　　盡管研究表明嗅神經(jīng)具有再生能力，但感覺神經(jīng)性嗅覺損傷后，僅有少部分患者可以恢復(fù)嗅覺功能。目前對于感覺神經(jīng)性嗅覺障礙尚無滿意的治療方法。多項研究證實，iPSCs不僅可以由體細(xì)胞重編程而來，而且其功能與胚胎干細(xì)胞(ESCs)十分類似，具有能夠向各類細(xì)胞分化的能力，無免疫排斥及倫理道德問題，本實驗擬探索 iPSCs能否在體外被誘導(dǎo)分化為嗅受體神經(jīng)元及僧帽/叢細(xì)胞，從而為細(xì)胞移植治療感覺神經(jīng)性嗅覺障礙提供實驗基礎(chǔ)。

2、　　目的：
　　探討小鼠iPSCs在體外是否具有向嗅受體神經(jīng)元和僧帽/叢細(xì)胞分化的潛能。
　　研究內(nèi)容和方法：
　　1.小鼠iPSCs的培養(yǎng)及多能性基因鑒定：小鼠胚胎成纖維細(xì)胞提取、傳代及飼養(yǎng)層制備，小鼠iPSCs接種于飼養(yǎng)層上培養(yǎng)，擬胚體(EB)制備，RT-PCR鑒定iPSCs多能性基因 Oct4, Nanog, Sox2的情況。
　　2.小鼠iPSCs與嗅上皮共培養(yǎng)及免疫學(xué)鑒定：分離小鼠嗅上皮細(xì)胞，將小鼠iP

3、SCs與其共培養(yǎng)，對分化細(xì)胞用嗅受體神經(jīng)元的標(biāo)志物（OMP,GAP43， NCAM）進(jìn)行免疫熒光及RT-PCR鑒定。
　　3.小鼠iPSCs與嗅球共培養(yǎng)及免疫學(xué)鑒定：分離小鼠嗅球細(xì)胞，將小鼠iPSCs與其共培養(yǎng)，對分化細(xì)胞用僧帽/叢細(xì)胞的標(biāo)志物(TBX21，Iba1)進(jìn)行免疫熒光及RT-PCR鑒定。
　　結(jié)果：
　　1.建立小鼠iPSCs穩(wěn)定培養(yǎng)體系及EB制備，且RT-PCR顯示小鼠 iPSCs表達(dá)多能性基因Sox2,