貴州苗藥“消疤草”預(yù)防肝纖維化及作用機(jī)理研究.pdf

1、目的：
　　為確證貴州苗藥“消疤草”預(yù)防肝纖維化功效，并探討其可能的作用機(jī)理。
　　方法:
　　Wistar大鼠90只，隨機(jī)分為正常對(duì)照組、模型組、陽(yáng)性藥物（扶正化瘀膠囊0.525 g.kg-1）對(duì)照組，“消疤草”(Xiaobacao,XBC)高、中、低劑量組（“消疤草”煎液原液、1/5原液、1/10原液），每組15只。除正常對(duì)照組外，各組予30％乙醇灌胃、豬血清腹腔注射、40%CCl4葵花籽油溶液皮下注射，及喂飼高脂

2、飼料制造復(fù)合因素肝纖維化模型；實(shí)驗(yàn)藥物配成一定濃度，于造模當(dāng)天開始按1ml/100g體質(zhì)量進(jìn)行灌胃預(yù)防肝纖維化，每日1次，連續(xù)8周，正常對(duì)照組與模型組大鼠每日予等體積的蒸餾水灌胃。實(shí)驗(yàn)結(jié)束后，取股動(dòng)脈血用自動(dòng)生化儀檢測(cè)血清丙氨酸轉(zhuǎn)氨酶(Alanine aminotransferase,ALT)、天冬氨酸轉(zhuǎn)氨酶(Aspartate aminotransferase,AST)、白蛋白(Albumin,ALB)；HE染色、Masson染色觀察

3、肝臟病理變化；ELISA法檢測(cè)血清基質(zhì)金屬蛋白酶-13(Matrix Metalloproteinase-13,MMP-13)、基質(zhì)金屬蛋白酶抑制劑-1(Tissue Inhibitor of Matrixmetalloproteinase-1,TIMP-1)；免疫組化法檢測(cè)肝組織Ⅰ型膠原(Cllagean-Ⅰ,Col-Ⅰ)、轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子-β1(Transfomling Gmwth Factor-beta1,TGF-β1)、α-平滑肌肌

4、動(dòng)蛋白(α-SmoothMuscle Actin,α-SMA)；實(shí)時(shí)熒光定量PCR技術(shù)(Real time PCR,RT-PCR)檢測(cè)肝組織TGF-β1；Western blot檢測(cè)肝組織Smad3、Smad7蛋白。
　　結(jié)果：
　　①與各實(shí)驗(yàn)組相比，模型組ALT、AST偏高，ALB偏低(P<0.05)，扶正化瘀組AST高于XBC中劑量組(P<0.05)，XBC各劑量之間ALT、AST、ALB含量差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　

5、?、谀Ｐ徒M血清中MMP-13低于扶正化瘀組及各實(shí)驗(yàn)藥物組，且XBC高劑量組明顯高于扶正化瘀組與低劑量組(P<0.05)。TIMP-1的結(jié)果則在正常對(duì)照組中水平最低，模型組水平最高(P<0.05)，扶正化瘀組與XBC各組相比較差異無意義，但 XBC高、低劑量組間差異顯著(P<0.05)。
　?、跦E染色、Masson染色結(jié)果示正常對(duì)照組大鼠肝臟未見明顯異常。模型組大鼠可見典型的肝纖維化、肝硬化形成，扶正化瘀組、XBC高、中劑量組同模

6、型組相比，肝臟炎癥程度減輕(P<0.05)，三組間無顯著差異；測(cè)定膠原面積比提示模型組明顯高于其他組(P<0.05)，扶正化瘀組的面積比值低于XBC干預(yù)組(P<0.05)；而XBC高劑量組膠原面積比值明顯低于中、低劑量組(P<0.05)。
　　④免疫組化結(jié)果提示Col-Ⅰ、TGF-β1、α-SMA在正常對(duì)照組為弱陽(yáng)性表達(dá)或幾乎不表達(dá)，平均光密度值(Average Optical Density,AOD)顯著低于其他組(P<0.05

7、)；模型組為強(qiáng)陽(yáng)性表達(dá)，AOD最高，與其他各組比較差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，扶正化瘀組與XBC高、中、低劑量組可見陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)目顯著減少，胞質(zhì)染色較淺，AOD居于正常對(duì)照組與模型組之間；扶正化瘀組與XBC高、中、低劑量組相比較，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，XBC煎液的各劑量組中，以高和(或)中劑量組降低最明顯。
　?、軷T-PCR示TGF-β1mRNA在正常對(duì)照組比其他各組表達(dá)水平低下(P<0.05)，模型組肝組織

8、中TGF-β1mRNA大量表達(dá)，與扶正化瘀組及XBC高、中、低劑量組比較差異顯著(P<0.05)；扶正化瘀組與XBC高、中、低劑量組間表達(dá)差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　?、弈Ｐ徒M大鼠肝組織Smad3蛋白表達(dá)明顯增強(qiáng)，Smad7蛋白表達(dá)明顯減少；與模型組比較，扶正化瘀組與XBC各組的Smad3的表達(dá)量降低、Smad7的表達(dá)量增加，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)；XBC高劑量組與中、低劑量組之間比較差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。