潰瘍性結(jié)腸炎大鼠模型TNF-α、Beclin1的變化及健脾益腸散的干預(yù)研究.pdf

1、目的：
　　本實(shí)驗(yàn)通過(guò)觀(guān)察潰瘍性結(jié)腸炎(Ulcerative Colitis，UC)大鼠模型一般狀況、疾病活動(dòng)指數(shù)(Disease Activity Index，DAI)評(píng)分、結(jié)腸組織病理學(xué)改變以及血清中TNF-α、結(jié)腸黏膜組織Beclin1的含量，及不同藥物干預(yù)治療后上述指標(biāo)的變化，探討TNF-α和Beclin1與UC的關(guān)系以及健脾益腸散治療UC大鼠的作用機(jī)理，為其臨床推廣應(yīng)用提供科學(xué)依據(jù)。
　　方法:
　　將60只

2、大鼠按隨機(jī)數(shù)字表法選取10只為正常組，其余均采用2、4、6-三硝基苯磺酸（TNBS）/乙醇法建立UC大鼠模型。將造模后的大鼠又隨機(jī)分為模型組、柳氮磺吡啶組和健脾益腸散高、中、低劑量組，每組10只。正常組正常飼養(yǎng)，模型組予蒸餾水灌胃，柳氮磺吡啶組予柳氮磺吡啶藥液灌胃，健脾益腸散高、中、低劑量組分別予相應(yīng)濃度的健脾益腸散灌胃。連續(xù)灌胃21天，記錄各組大鼠飲食、體質(zhì)量、大便性狀及精神狀態(tài)等進(jìn)行DAI評(píng)分；觀(guān)察病變處結(jié)腸組織病理學(xué)改變；并采用E

3、LISA法測(cè)定各組大鼠血清中TNF-α的含量、免疫組化法和Western blot法檢測(cè)結(jié)腸黏膜組織中Beclin1的表達(dá)。
　　結(jié)果:
　?。?）正常組大鼠進(jìn)食量逐漸增加，體質(zhì)量加重，活潑好動(dòng)，皮毛光亮，大便正常，呈卵圓形褐色顆粒狀；模型組大鼠在造模后立即出現(xiàn)精神萎靡，喜拱背、扎堆，進(jìn)食及飲水明顯減少，體質(zhì)量減輕，皮毛暗淡無(wú)光雜亂污穢，肛周可見(jiàn)膿血樣稀便附著，個(gè)別見(jiàn)陰囊下垂，都有不同程度的黏液膿血便、腹瀉、便不成形等，2周

4、后上述癥狀逐漸好轉(zhuǎn)，但至實(shí)驗(yàn)結(jié)束時(shí)仍有腹瀉、便不成形情況。健脾益腸散高劑量與中劑量組及柳氮磺吡啶組造模后亦出現(xiàn)上述癥狀，但經(jīng)予相應(yīng)藥物治療后約1周左右，即有不同程度的緩解，進(jìn)食及進(jìn)水均有所增多，體質(zhì)量增長(zhǎng)，腹瀉及膿血便逐漸減少；約2周后黏液膿血便等現(xiàn)象顯著減少，大便恢復(fù)成顆粒狀。（2）模型組的DAI評(píng)分明顯較正常組升高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.01）；健脾益腸散高、中劑量組及柳氮磺吡啶組的DAI評(píng)分與模型組相比均顯著降低（P＜0.01

5、）；健脾益腸散高劑量組與柳氮磺吡啶組的DAI評(píng)分差異不顯著（P＞0.05），但較健脾益腸散中、低劑量組的DAI評(píng)分低（P＜0.05或P＜0.01）。（3）正常組大鼠組織病理學(xué)顯示，結(jié)腸粘膜上皮完整，各層組織結(jié)構(gòu)清晰，腺體排列整齊，粘膜層、粘膜下層未見(jiàn)炎癥細(xì)胞浸潤(rùn)，未見(jiàn)充血、水腫及潰瘍的發(fā)生。模型組大鼠各層組織結(jié)構(gòu)破壞，細(xì)胞間隙增寬，潰瘍?cè)钚纬?，個(gè)別深達(dá)固有層，可見(jiàn)中性粒細(xì)胞廣泛浸潤(rùn)，并伴有杯狀細(xì)胞丟失。健脾益腸散高、中劑量組結(jié)腸粘膜上皮

6、基本完整，各層結(jié)構(gòu)較清晰，可見(jiàn)散在中性粒細(xì)胞浸潤(rùn)，而炎癥細(xì)胞浸潤(rùn)明顯減輕。柳氮磺吡啶組各層結(jié)構(gòu)基本清晰，散在少量中性粒細(xì)胞和炎癥細(xì)胞浸潤(rùn)。（4）模型組大鼠血清 TNF-α水平顯著高于正常組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義( P＜0.01);健脾益腸散高劑量組和柳氮磺吡啶組的血清TNF-α水平與模型組比較均降低( P＜0.05);健脾益腸散高劑量組與中劑量組、柳氮磺吡啶組差異不顯著( P＞0.05)，但較低劑量組降低(P＜0.05)。（5）免疫組化檢測(cè)

7、法：Beclin1陽(yáng)性表達(dá)可見(jiàn)于結(jié)腸黏膜下層及肌層。各組大鼠結(jié)腸組織Beclin1陽(yáng)性表達(dá)平均OD值統(tǒng)計(jì)結(jié)果顯示，模型組大鼠結(jié)腸Beclin1蛋白表達(dá)較正常組增加（P＜0.05）；健脾益腸散高、中、低劑量組及柳氮磺吡啶組Beclin1蛋白表達(dá)均較模型組增加，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05或P＜0.01）；健脾益腸散高劑量組與柳氮磺吡啶組比較差異不顯著（P>0.05）。Western blot檢測(cè)法：正常組有低水平Beclin1蛋白表達(dá)，

8、各實(shí)驗(yàn)組大鼠結(jié)腸組織提取的蛋白在相對(duì)分子量約41KD處出現(xiàn)陽(yáng)性條帶，模型組Beclin1蛋白表達(dá)增高，與正常組比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。健脾益腸散高、中、低劑量組及柳氮磺吡啶組Beclin1表達(dá)均較模型組增高（P＜0.05或P＜0.01）。結(jié)論：（1）健脾益腸散可以緩解UC大鼠的一般情況，減輕粘膜損傷情況，降低DAI評(píng)分，高劑量組優(yōu)于中、低劑量組，與柳氮磺吡啶組效果相仿。（2）造模成功后的UC大鼠其血清中TNF-α和結(jié)腸黏膜