TNF-α單克隆抗體對潰瘍性結(jié)腸炎大鼠治療作用的試驗研究.pdf

1、方法：選取48只成年Wistar鼠隨機分成正常組、艾迪莎組、TNF-α單克隆抗體低劑量組、中劑量、高劑量組和模型組每組各8只，雌雄各4只。采用Morris報道的2，4，6-三硝基苯磺酸(TNBS)法造模：將大鼠禁食36h后麻醉，一次性將TNBS(100mg/kg)和0.4mL50％乙醇溶液用橡膠輸液管緩慢注入距肛門約8cm處的腸腔內(nèi)。造模后1天模型組和對照組，予以生理鹽水(0.9％Nacl溶液)，每日1次，每次2mL，艾迪莎組給予100

2、mg/kg每天灌腸、TNF-α單克隆抗體低劑量給予2.5mg/kg，中劑量給予5mg/kg，高劑量給予10mg/kg皮下注射，第1，7日給藥。給藥期間觀察大鼠的一般狀況。2周后，尾靜脈取血1.5ml，ELISA檢測各組大鼠TNF-α、IL-8，各組大鼠經(jīng)20％烏拉坦(0.6ml/100g)麻醉，斷頸處死，將結(jié)腸平鋪于臘板上，大頭針固定，觀察指標(biāo)：(1)結(jié)腸重量(2)大體形態(tài)粘膜損傷(3)HE染色病理觀察結(jié)果：1．大鼠的一般情況、結(jié)腸組織

3、大體觀察、結(jié)腸重量和腸粘膜損傷程度評分：(1)一般情況：造模大鼠于造模起2天，可出現(xiàn)粘液稀便和血便，肛周污穢，1周左右癥狀更加嚴(yán)重，可見濃血便、消瘦、體重減輕，毛色失去光澤，精神倦怠甚至萎靡，活動及進食明顯減少。正常組無上述變化。(2)結(jié)腸組織大體觀察：正常組腸粘膜光滑，無水腫、出血、潰瘍、腸壁增厚等表現(xiàn)。模型組可見腸粘膜充血、水腫、糜爛、壞死、腸壁增厚、潰瘍形成。(3)結(jié)腸重量變化：模型組明顯高于正常對照組(P＜0.01)，TNF-α

4、單克隆抗體低劑量組、中劑量、高劑量組、艾迪莎組明顯低于模型組(P＜0.01)，TNF-α單克隆抗體低劑量組、中劑量、高劑量組、艾迪莎組之間無明顯差異。(4)腸粘膜損傷評分：模型組明顯高于正常對照組(P＜0.01)，TNF-α單克隆抗體低劑量組、中劑量、高劑量組、艾迪莎組明顯低于模型組(P＜0.01)，TNF-α單克隆抗體低劑量組，中劑量、高劑量組，艾迪莎組之間無明顯差異。2HE染色：①正常組表現(xiàn)為正常結(jié)腸結(jié)構(gòu)，腸壁由粘膜層、粘膜下層．肌

5、層和漿膜等四層組成。②模型組為典型炎癥粘膜表現(xiàn)，可見粘膜、粘膜下層甚至肌層大量炎性細(xì)胞浸潤，腺體破壞，結(jié)構(gòu)紊亂，杯狀細(xì)胞減少，隱窩膿腫形成，粘膜下層出血、水腫，毛細(xì)血管擴張可見。③TNF-α單克隆抗體低劑量組、中劑量、高劑量組、艾迪莎組可見病變減輕，潰瘍愈合，粘膜腺體增生好轉(zhuǎn)，腺體杯狀細(xì)胞增多，隱窩膿腫消失。3TNF-α表達(dá)：模型組TNF-α含量明顯高于正常對照組(P＜0.01)，TNF-α單克隆抗體各組、艾迪莎組血TNF-α含量明顯低

6、于模型組(P＜0.01，TNF-α單克隆抗體低劑量TNF-α含量低于TNF-α單克隆抗體中劑量、高劑量組和艾迪莎組(P＜0.05)4IL-8表達(dá)：模型組IL-8含量明顯高于正常對照組(P＜0.01)，TNF-α單克隆抗體各組、艾迪莎組血液中IL-8含量明顯低于模型組(P＜0.01)，TNF-α單克隆抗體低劑量組、中劑量、高劑量組、艾迪莎組之間無明顯差異。 結(jié)論：1．應(yīng)用2，4，6-三硝基苯磺酸(TNBS)法制備的UC大鼠模型是探