慢性充血性心力衰竭大鼠下丘腦室旁核CRH神經(jīng)元激活相關(guān)機制及芪藶強心膠囊干預(yù)研究.pdf

1、目的:本研究以中醫(yī)理論為指導(dǎo)，分別采用SD大鼠、Lewis大鼠與Fisher344大鼠冠狀動脈前降支結(jié)扎方法制作心肌梗死致慢性心衰模型，并用芪藶強心膠囊(QLQX)進行干預(yù)，探討模型大鼠下丘腦室旁核(PVN)促腎上腺皮質(zhì)激素釋放激素（CRH)申經(jīng)元激活及其與交感神經(jīng)活性增強、血流動力學(xué)變化、心室重構(gòu)的關(guān)系，同時觀察中藥芪藶強心膠囊的干預(yù)作用及可能的機制。
　　方法:
　　本研究分為以下三部分:
　　1、慢性充血性心力衰

2、竭(CHF)大鼠模型的建立及下丘腦室旁核CRH神經(jīng)元激活的研究
　　以Lewis大鼠、Fisher344大鼠和SD大鼠為研究對象，采用結(jié)扎冠狀動脈左前降支致大鼠急性心肌梗死后心力衰竭模型，并將SD大鼠分為正常對照組(Control)、假手術(shù)組（Sham）、模型組(Model)，Lewis組，F(xiàn)isher344組，共5組，每組15只。造模4周后觀察各組大鼠生物學(xué)表征，檢測各組大鼠血流動力學(xué)變化，測定血液腦利鈉肽(BNP)、血管緊張素

3、Ⅱ(AngⅡ)、去甲腎上腺素(NE)、促腎上腺皮質(zhì)激素(ACTH)與前列腺素E2(PGE2)含量及下丘腦CRH神經(jīng)元、垂體ACTH神經(jīng)元的表達，對慢性心衰大鼠下丘腦室旁核CRH神經(jīng)元的激活作用進行研究。
　　2、芪藶強心膠囊經(jīng)側(cè)腦室注射對慢性心力衰竭大鼠心功能及心室重構(gòu)的干預(yù)作用
　　采用冠狀動脈左前降支結(jié)扎致SD大鼠急性心肌梗死后心力衰竭模型，分為正常對照組(Control)、假手術(shù)組(Sham)、模型組(Model)，C

4、RH競爭性抑制劑組(αh-CRH)、芪藶強心低劑量組(QLRY-L)、芪藶強心高劑量組(QLRY-H)，共6組，每組15只。造模4周后αh-CRH組、QLRY-L、H組經(jīng)側(cè)腦室打孔連接微量注射泵連續(xù)注射藥物，正常對照組、假手術(shù)組和模型組給予空白人工腦脊液(aCSF)。給藥4周后測定各組大鼠血流動力學(xué)，進行心臟HE染色，檢測各組大鼠心重指數(shù)、肺重指數(shù)及梗死區(qū)重/全心重，觀察芪藶強心膠囊經(jīng)側(cè)腦室給藥對心衰模型大鼠心功能及心室重構(gòu)的干預(yù)作用。

5、
　　3、慢性心衰大鼠下丘腦室旁核CRH神經(jīng)元激活相關(guān)機制及芪藶強心膠囊的干預(yù)作用
　　實驗分組、造模方法及給藥方法同第二部分。給藥4周后，PCR測定PVN內(nèi)CRH、腫瘤壞死因子-α(TNF-α)、神經(jīng)型一氧化氮合酶(nNOS)與垂體內(nèi)ACTH的mRNA表達，ELISA檢測下丘腦NE、5-羥色胺(5-HT)與血漿PGE2、NE、ACTH的含量，探討炎性因子、神經(jīng)遞質(zhì)與CRH神經(jīng)元激活的關(guān)系及芪藶強心膠囊對心衰大鼠的干預(yù)作用，

6、對心衰時CRH神經(jīng)元激活的相關(guān)機制及其與交感神經(jīng)過度激活之間的關(guān)系進行闡述。
　　結(jié)果:
　　1、慢性充血性心力衰竭大鼠模型的建立及下丘腦室旁核CRH神經(jīng)元激活的研究
　　1.1各組大鼠生物學(xué)表征觀察
　　正常組與假手術(shù)組大鼠活潑好動，毛發(fā)光亮，反應(yīng)靈敏;模型組大鼠出現(xiàn)精神萎頓，毛發(fā)干枯無光澤，倦怠懶動等癥狀，個別可見毛發(fā)枯黃無光澤，甚至脫落，精神萎靡不振，對抗攻擊性行為減少或消失;Lewis組大鼠反應(yīng)稍遲鈍，毛

7、發(fā)枯黃，自主活動減少;Fisher344組精神萎靡不振，毛發(fā)枯槁，稀疏脫落，對抗攻擊性行為消失。
　　1.2各組大鼠血流動力學(xué)檢測結(jié)果
　　與Lewis組比較，F(xiàn)isher344組LVSP、+dp/dtmax降低，LVEDP顯著升高(P＜0.05，P＜0.01);與假手術(shù)組比較，模型組大鼠LVSP、±dp/dtmax顯著降低，LVEDP明顯升高（P＜0.01）;與模型組比較，Lewis組LVSP、-dp/dtmax升高，LV

8、EDP降低，F(xiàn)isher344組LVSP、+dp/dtmax降低，LVEDP升高(P＜0.05，P＜0.01)。
　　1.3各組大鼠血液BNP、AngⅡ、NE、ACTH與PGE2含量變化
　　與Lewis組比較，F(xiàn)isher344組血液中以上指標含量均增加(P＜0.05，P＜0.01);與假手術(shù)組比較，模型組大鼠以上指標含量均顯著增加(P＜0.05，P＜0.01);與模型組比較，Lewis組BNP、ACTH與PGE2含量均減

9、少，F(xiàn)isher344組以上指標含量均增加(P＜0.05，P＜0.01)。
　　1.4各組大鼠下丘腦CRH和腦垂體ACTHmRNA表達變化
　　與Lewis組大鼠比較，F(xiàn)isher344組大鼠以上指標表達水平明顯上升(P＜0.01);與假手術(shù)組比較，模型組大鼠下丘腦CRH和腦垂體ACTHmRNA表達水平顯著上升(P＜0.01);與模型組比較，Lewis組以上指標表達水平均下降，F(xiàn)isher344組以上指標均升高(P＜0.05

10、，P＜0.01)。
　　2、芪藶強心膠囊經(jīng)側(cè)腦室注射對慢性心力衰竭大鼠心功能及心室重構(gòu)的干預(yù)作用
　　2.1各組大鼠血流動力學(xué)檢測結(jié)果
　　與假手術(shù)組大鼠比較，模型組LVSP與±dp/dtmax顯著降低，LVEDP顯著升高（P＜0.01）;與模型組比較，各給藥組均可顯著升高±dp/dtmax水平，降低LVEDP水平，αh-CRH組、QLRY-H組可明顯升高LVSP水平(P＜0.05，P＜0.01)。
　　2.2各

11、組大鼠心臟HE染色光鏡觀察
　　正常組與假手術(shù)組心肌組織正常，未見心肌纖維化和炎性細胞侵潤現(xiàn)象。模型組心肌纖維化嚴重，有大量炎細胞侵潤。各給藥組均可不同程度抑制心肌纖維化，減輕炎細胞侵潤現(xiàn)象。
　　2.3各組大鼠心重指數(shù)、肺重指數(shù)及梗死區(qū)重/全心重結(jié)果
　　與假手術(shù)組比較，模型組以上指標數(shù)據(jù)顯著增加(P＜0.01);與模型組比較，αh-CRH組、QLRY-H組可不同程度的降低以上指標，QLRY-L組可降低心重指數(shù)、梗死

12、區(qū)重/全心重(P＜0.05，P＜0.01)。
　　3、慢性心衰大鼠下丘腦室旁核CRH神經(jīng)元激活相關(guān)機制及芪藶強心膠囊的干預(yù)作用
　　3.1各組大鼠下丘腦CRH、TNF-α、nNOS及垂體ACTH的mRNA表達水平變化
　　與假手術(shù)組比較，模型組CRH、TNF-α的mRNA表達水平顯著升高，nNOS mRNA表達水平顯著下降(P＜0.01);與模型組比較，各給藥組CRH、TNF-α的mRNA表達水平顯著下降，nNOSmR

13、NA表達升高，且以αh-CRH組、QLRY-H組變化較為明顯(P＜0.05，P＜0.01)。
　　3.2各組大鼠下丘腦室旁核NE、5-HT含量的變化
　　與假手術(shù)組比較，模型組下丘腦室旁核NE、5-HT含量顯著升高(P＜0.01);與模型組比較，各給藥組下丘腦室旁核NE、5-HT含量顯著下降(P＜0.01)。
　　3.3血漿BNP、NE、ACTH、PGE2含量變化
　　與假手術(shù)組比較，模型組血漿以上指標含量均顯著

14、增加(P＜0.01);與模型組比較，各給藥組均可不同程度降低上述指標的含量，以αh-CRH組與QLRY-H組較為明顯(P＜0.05，P＜0.01)。
　　結(jié)論:
　　1、通過SD大鼠、Lewis大鼠與Fisher344大鼠比較及實驗結(jié)果表明心衰時存在PVN內(nèi)CRH神經(jīng)元激活并通過促進交感神經(jīng)活性及炎性因子表達參與了心衰的發(fā)生發(fā)展。
　　2、研究表明經(jīng)側(cè)腦室給予芪藶強心膠囊對心衰大鼠心功能有明顯改善作用，并可有效抑制心室