MicroRNA-7調(diào)控在IL-1β誘導(dǎo)的髓核細(xì)胞外基質(zhì)退變中的作用研究.pdf

1、在椎間盤退變的過(guò)程中，IL-1β引起的細(xì)胞外基質(zhì)退變的機(jī)制尚不明確。近幾年的研究表明，microRNA與椎間盤退變有關(guān)，但是它在髓核組織細(xì)胞外基質(zhì)退變中的作用仍不清楚。本研究的目的是研究mir-7在IL-1β引起的椎間盤退變中的表達(dá)及作用。
　　首先，以定量即時(shí)聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)檢測(cè)mir-7在退變的髓核組織以及IL-1β處理后的髓核細(xì)胞中的表達(dá)程度。運(yùn)用miRNAs網(wǎng)上數(shù)據(jù)庫(kù)和計(jì)算機(jī)分析預(yù)測(cè)mir-7的靶蛋白，以雙熒光素酶報(bào)告系統(tǒng)和

2、Western分析檢測(cè)mir-7與潛在靶蛋白3-UTRs的作用，驗(yàn)證GDF5是否為miR-7的一個(gè)靶基因。最后，測(cè)定基質(zhì)組分及基質(zhì)降解酶的mRNA和蛋白表達(dá)水平，闡明miR-7在IL-1β誘導(dǎo)椎間盤退變過(guò)程中的作用。
　　本研究，我們發(fā)現(xiàn)與對(duì)照組相比，miR-7在人退變的髓核組織以及在IL-1β處理后的髓核細(xì)胞中表達(dá)升高。我們也驗(yàn)證GDF5是miR-7的一個(gè)靶基因。在人類髓核細(xì)胞中，miR-7過(guò)表達(dá)導(dǎo)致GDF5 mRNA和蛋白的減

3、少，然而下調(diào)miR-7則能引起GDF5mRNA和蛋白的過(guò)表達(dá)。熒光素酶報(bào)告分析證實(shí)miR-7直接靶向調(diào)控GDF5。功能分析表明過(guò)表達(dá)miR-7顯著增強(qiáng)IL-1β引起的collagenⅡ和aggrecan表達(dá)減少以及mmp-13和ADAMTS4表達(dá)的上調(diào)，而下調(diào)miR-7顯著逆轉(zhuǎn)IL-1β引起的髓核細(xì)胞退變進(jìn)程。另外地，沉默miR-7逆轉(zhuǎn)IL-1β誘導(dǎo)髓核細(xì)胞外基質(zhì)退變的作用能夠被siGDF5減弱。
　　綜上所述，這些研究表明miR