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文檔簡介
1、肺臟是機(jī)體進(jìn)行氣體交換的器官,其直接受到經(jīng)氣道呼入的外源微生物的侵染。越來越多的證據(jù)表明,在肺臟組織中具有干細(xì)胞特性的肺泡二型上皮細(xì)胞(AECⅡ)在機(jī)體防御外源微生物,特別是結(jié)核分枝桿菌(Mtb)的侵染中具有重要的作用,其主要是通過分泌細(xì)胞因子和促炎細(xì)胞因子等參與肺臟組織的免疫調(diào)控和炎癥反應(yīng),與巨噬細(xì)胞等免疫細(xì)胞共同清除外源病原微生物。有證據(jù)表明,調(diào)控胚胎發(fā)育的Hedgehog信號通路在機(jī)體抵抗炎癥反應(yīng)中也發(fā)揮重要的作用,并且這種調(diào)節(jié)作
2、用與NF-κB信號通路存在復(fù)雜的雙邊關(guān)系,這提示我們,Hedgehog和NF-κB信號通路可能在機(jī)體防御Mtb入侵肺臟的免疫應(yīng)答過程中具有調(diào)控作用。
目的:
探討Mtb在感染AECⅡ(A549)細(xì)胞的免疫應(yīng)答過程中Hedgehog與NF-κB信號通路及炎癥細(xì)胞因子的表達(dá)變化。
方法:
本試驗利用BCG和H37Rv分別感染AECⅡ細(xì)胞A549和過表達(dá)Shh/NF-κB的A549細(xì)胞,qPCR、Wes
3、tern blot和ELISA檢測Hedgehog信號通路和NF-κB信號通路相關(guān)因子和炎癥細(xì)胞因子的表達(dá)變化。
結(jié)果:
1.H37Rv和BCG感染A549細(xì)胞后, Hedgehog信號通路中Shh、Ptch和Glil與NF-κB信號通路中p-NF-κB的表達(dá)升高,同時,伴隨著炎癥細(xì)胞因子IL-8和TNF-α的表達(dá)升高。并且,BCG感染A549細(xì)胞引起信號分子Shh、Ptch、Glil和NF-κB的表達(dá)高于H37Rv
4、。
2.在A549細(xì)胞中過表達(dá)NF-κB時,促進(jìn)了Shh、Glil和IL-6、IL-8的表達(dá);用BCG感染NF-κB過表達(dá)的A549細(xì)胞時促進(jìn)了Shh、Glil、p-NF-κB、IL-6、IL-8和TNF-α的表達(dá);用H37Rv感染NF-κB過表達(dá)的A549細(xì)胞時,也促進(jìn)了Shh、Glil和p-NF-κB和炎癥細(xì)胞因子IL-6和IL-8的表達(dá),但表達(dá)量低于BCG感染組。
3.在A549細(xì)胞中過表達(dá)Shh時促進(jìn)了Shh
5、、Glil和p-NF-κB,以及炎癥細(xì)胞因子IL-8和TNF-α的表達(dá);當(dāng)用BCG和H37Rv感染Shh過表達(dá)的A549細(xì)胞Shh、Glil和p-NF-κB的表達(dá)高于Shh過表達(dá)組和空白對照組;用BCG感染Shh過表達(dá)組,促進(jìn)了IL-6和IL-8的表達(dá);用H37Rv感染Shh過表達(dá)組,促進(jìn)了IL-12A和TNF-α的表達(dá)。
結(jié)論:
1.H37Rv和BCG感染AECⅡ細(xì)胞都能激活Hedgehog信號通路和NF-κB信號
6、通路并促進(jìn)細(xì)胞的炎癥反應(yīng),Hedgehog信號通路和NF-κB信號通路具有相互促進(jìn)的關(guān)系,但是H37Rv感染對這兩個信號通路的活化弱于BCG的感染,而H37Rv感染AECⅡ細(xì)胞引起的炎癥細(xì)胞因子的表達(dá)高于BCG感染。
2.過表達(dá)Shh的AECⅡ細(xì)胞對炎癥反應(yīng)的調(diào)控與結(jié)核分枝桿菌的毒力有關(guān):BCG感染時抑制了炎癥細(xì)胞因子的表達(dá),而H37Rv感染促進(jìn)了炎癥細(xì)胞因子的表達(dá)。
3.過表達(dá)NF-κB的AECⅡ細(xì)胞,BCG和H3
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