新生大鼠胰腺干細(xì)胞的分離、培養(yǎng)、初步鑒定及其療效.pdf

1、目的：①成功分離、培養(yǎng)及初步鑒定新生大鼠胰腺干細(xì)胞。②建成可靠、穩(wěn)定的1型大鼠糖尿病模型，并將胰腺干細(xì)胞成功移植入大鼠體內(nèi)，使其分泌胰島素，降低血糖。③為利用胰腺干細(xì)胞移植治療糖尿病提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。
　　 方法：①取SPF級新生大鼠的胰腺組織，用完整胰腺膠原酶消化法分離胰島。②以低糖DMEM為基礎(chǔ)培養(yǎng)液，于不同時(shí)期分別添加血清、bFGF、EGF、ITS、LIF、N2、B27等進(jìn)行培養(yǎng)，倒置相差顯微鏡下觀察其形態(tài)學(xué)特征及生長特性。③

2、應(yīng)用免疫細(xì)胞化學(xué)法對培養(yǎng)不同時(shí)期的細(xì)胞進(jìn)行Nestin及CK19檢測，進(jìn)行初步鑒定。④給予雄性Wistar大鼠一次性腹腔注射STZ（Streptozotocin，鏈脲佐菌素）液65㎎/kg，7d后血糖>16.65mmoL/L判定為1型糖尿病動物模型。⑤將成模的大鼠分為兩組，實(shí)驗(yàn)組接受腹腔移植胰腺干細(xì)胞，移植細(xì)胞數(shù)約為2×10個(gè)，對照組移植不含細(xì)胞的培養(yǎng)液。兩組大鼠均于移植前48h測定空腹血糖，移植后每周測空腹血糖1次。
　　 結(jié)

3、果：①新生大鼠胰腺內(nèi)纖維組織少，體積小，完整胰腺膠原酶消化法簡化了胰島分離步驟，減少了污染機(jī)會，有利于進(jìn)一步培養(yǎng)。②在培養(yǎng)的24h可見細(xì)胞貼壁，但貼壁細(xì)胞數(shù)量較少，改用無血清培養(yǎng)后，貼壁細(xì)胞快速長，10-15d形成單層細(xì)胞匯集，細(xì)胞形態(tài)較一致。③培養(yǎng)所得細(xì)胞一直較多表達(dá)胰腺干細(xì)胞的標(biāo)志-Nestin，隨培養(yǎng)時(shí)間延長，表達(dá)CK-19的細(xì)胞數(shù)量逐漸增多。④大鼠注射STZ7d后，大部分血糖值達(dá)到成模標(biāo)準(zhǔn)。⑤實(shí)驗(yàn)組大鼠移植3周后血糖開始有不同程