雙氯芬酸對熱化療促結直腸癌細胞凋亡的增敏作用研究.pdf

1、目的：
　　探討雙氯芬酸對熱化療促結直腸癌細胞凋亡的增敏作用及分子機制。
　　方法：
　　1.應用MTS法測定細胞增殖抑制率，計算半數抑制率濃度（half maximal inhibitory concentration, IC50），確定順鉑和雙氯芬酸的工作濃度；
　　2.將實驗分為空白對照組、熱化療組和增敏組，再次應用MTS法測定細胞增殖抑制率，觀察雙氯芬酸是否能夠增強熱化療對人結直腸癌HC T116細胞增殖

2、的抑制作用；
　　3.應用葡萄糖測定試劑盒和乳酸測定試劑盒分別檢測細胞培養(yǎng)液中殘余葡萄糖含量及乳酸生成量，RT-PCR和Western Blot檢測各組HCT116細胞膜上葡萄糖轉運體1（glucose transporter1,GLUT1）mRNA和蛋白的表達，觀察雙氯芬酸對HCT116細胞能量代謝的影響；
　　4.應用流式細胞技術結合Annexin V-FITC/PI雙染法檢測各組HCT116細胞的凋亡率，RT-PCR和

3、Western Blot檢測各組HCT116細胞凋亡相關基因mRN A和蛋白的表達，觀察Ba x/Bc l-2比值的變化。
　　5.數據分析采用SPSS13.0統(tǒng)計軟件進行處理。計量資料用均數±標準差（mea n±SD）表示，兩樣本均數的比較以t檢驗進行統(tǒng)計學分析。多組間均數的比較，若滿足方差齊性則以單因素方差分析（one-way ANOVA）進行比較，組間兩兩比較采用LSD’s法；若方差不齊，則采用we lch檢驗，組間兩兩比較

4、采用Dunnett’s法進行統(tǒng)計學分析，P﹤0.05表示差異有統(tǒng)計學意義。
　　結果：
　　1.順鉑和雙氯芬酸在37℃和43℃條件下抑制HCT116細胞增殖的IC50分別為9.4μg/mL和5.2μg/mL、0.23 mM和0.12 mM。
　　2.雙氯芬酸能夠增強熱化療對HCT116細胞增殖的抑制作用。
　　3.經流式細胞儀檢測發(fā)現，增敏組的細胞凋亡率顯著高于熱化療組（P<0.05），結果表明雙氯芬酸可以增強熱

5、化療對HCT116細胞的促凋亡作用。
　　4.與熱化療組相比，增敏組HCT116細胞中促凋亡基因Bax表達顯著上調，而抗凋亡基因Bc l-2表達顯著下調，Ba x/Bc l-2比值增大。
　　5.雙氯芬酸通過下調HCT116細胞膜中GLUT1的表達，抑制其從培養(yǎng)液中攝取葡萄糖，阻礙有氧糖酵解過程，降低乳酸的生成，從而抑制了HCT116細胞的能量代謝。
　　結論：
　　雙氯芬酸能夠影響結直腸癌HCT116細胞的能量