高遷移率家族蛋白1在小鼠過敏性鼻炎及急性細(xì)菌性鼻竇炎中的表達(dá)及其意義.pdf

1、第一部分高遷移率家族蛋白1在過敏性鼻炎及急性細(xì)菌性鼻竇炎小鼠鼻黏膜中的表達(dá)及變化情況
　　目的：分別建立過敏性鼻炎及急性細(xì)菌性鼻竇炎小鼠模型。研究高遷移率家族蛋白1分別在過敏性鼻炎及急性細(xì)菌性鼻竇炎中的變化情況，探究其在上呼吸道急性炎癥中的意義；研究炎癥小體分別在急性細(xì)菌性鼻竇炎及過敏性鼻炎中的變化情況，探究其參與HMGB1釋放的可能性
　　方法：選取SPF級BALB/c小鼠，于實(shí)驗(yàn)第1、8、15日腹腔注射200μl含有40

2、μg卵清蛋白（OVA）及2mg氫氧化鋁的PBS，于實(shí)驗(yàn)第22日開始連續(xù)以濃度為250μg/10μl的OVA溶液對雙側(cè)鼻腔激發(fā)7日以建立急性過敏性鼻炎小鼠模型，末次OVA激發(fā)后計(jì)數(shù)10分鐘內(nèi)小鼠撓鼻及噴嚏次數(shù)，24小時(shí)后處死并收集標(biāo)本；選取SPF級C57BL/6，以20μl濃度為1mg/ml的脂多糖溶液雙側(cè)鼻腔滴加1次以建立急性細(xì)菌性鼻竇炎小鼠模型，分別于首次滴加脂多糖后的第4日處死小鼠，收集標(biāo)本進(jìn)行后續(xù)研究。處死小鼠后于解剖顯微鏡下收集

3、小鼠鼻腔黏膜，通過western-blot分別檢測Nlrp3、AIM2、Asc、caspase-1及HMGB1的表達(dá)變化，剩余小鼠經(jīng)灌注后行鼻腔灌洗，固定后脫鈣并脫水包埋用于后續(xù)形態(tài)學(xué)及免疫組化研究。
　　結(jié)果：1.過敏性鼻炎小鼠鼻黏膜內(nèi)可見大量嗜酸性粒細(xì)胞浸潤，血清中IgE含量較對照組明顯上升，過敏性鼻炎小鼠模型建立成功；2脂多糖滴加4日后可見小鼠竇腔內(nèi)大量中性粒細(xì)胞滲出，急性細(xì)菌性鼻竇炎建立成功；3.急性細(xì)菌性鼻竇炎小鼠鼻腔黏

4、膜增厚伴有中性粒細(xì)胞浸潤。3.急性細(xì)菌性鼻竇炎小鼠鼻黏膜中Nlrp3、Asc、caspase-1 p20等 Nlrp3炎癥小體組分表達(dá)增高,HMGB1表達(dá)增高且出現(xiàn)胞漿轉(zhuǎn)位。4.過敏性鼻炎小鼠鼻黏膜中AIM2、Asc、caspase-1 p20等AIM2炎癥小體組分表達(dá)增高，而Nlrp3表達(dá)下降，TUNEL顯示 TUNEL陽性細(xì)胞數(shù)較正常組明顯增多，同時(shí)未觀察到caspase-3及PARP-1的剪切，提示細(xì)胞炎性死亡的發(fā)生。
　　

5、結(jié)論：AR及ABRS小鼠鼻黏膜中存在HMGB1表達(dá)升高及釋放，AIM2炎癥小體和Nlrp3炎癥小體分別在AR和ABRS小鼠鼻黏膜中激活，可能參與了HMGB1的釋放。
　　第二部分丙酮酸乙酯通過抑制高遷移率家族蛋白1減輕小鼠過敏性鼻炎及急性細(xì)菌性鼻竇炎
　　目的：分別建立過敏性鼻炎及急性細(xì)菌性鼻竇炎小鼠模型，并利用丙酮酸乙酯進(jìn)行干預(yù)，觀察疾病模型中丙酮酸乙酯的作用，同時(shí)對其通過HM GB1發(fā)揮作用的機(jī)制進(jìn)行初步探討。
　

6、　方法：同第一部分分別建立過敏性鼻炎及急性細(xì)菌性鼻竇炎小鼠模型，在給予 OVA刺激前30分鐘以各濃度（50 mg/k g、100 mg/k g）丙酮酸乙酯對AR小鼠進(jìn)行腹腔注射，后進(jìn)行 OVA激發(fā)持續(xù)至模型建立結(jié)束。急性細(xì)菌性鼻竇炎組小鼠于滴加 LPS前30分鐘予以50mg/kg丙酮酸乙酯腹腔注射，后滴加LPS。小鼠于滴加LPS后4日處死，收集標(biāo)本并通過HE染色比較各組間中性粒細(xì)胞浸潤情況，western-blot及免疫組化觀察HMGB

7、1胞漿轉(zhuǎn)位及表達(dá)情況，同時(shí)TLR-4及NF-κB的表達(dá)情況也一并檢測。過敏性鼻炎小鼠組于末次激發(fā)后計(jì)數(shù)小鼠撓鼻及噴嚏次數(shù)，次日處死小鼠，收集標(biāo)本。處死小鼠后于解剖顯微鏡下收集小鼠鼻腔黏膜，通過 western-blot及免疫組化檢測HMGB1的表達(dá)變化，剩余小鼠經(jīng)灌注后行鼻腔灌洗，鼻腔灌洗液用于檢測各組IL-4、IL-13變化情況，血清用于檢測OVA相關(guān)IgE、Ig2a及IgG1的變化情況。
　　結(jié)果：1. OVA誘導(dǎo)過敏性鼻炎小

8、鼠鼻黏膜內(nèi)可見大量嗜酸性粒細(xì)胞浸潤，丙酮酸乙酯處理顯著降低嗜酸性粒細(xì)胞浸潤程度，且減輕效果呈劑量依賴性。丙酮酸乙酯顯著抑制過敏性鼻炎小鼠鼻黏膜內(nèi)HMGB1的表達(dá)以及胞漿轉(zhuǎn)位，并減輕過敏性鼻炎小鼠撓鼻及噴嚏等過敏性鼻炎癥狀（p＜0.05）。丙酮酸乙酯顯著降低過敏性鼻炎小鼠鼻腔灌洗液中IL-4、IL-13的含量。丙酮酸乙酯對血清中OVA相關(guān)IgE、Ig2a及IgG并無顯著作用。2.脂多糖誘導(dǎo)急性鼻竇炎小鼠鼻竇腔內(nèi)可見大量中性粒細(xì)胞滲出，50