高遷移率族蛋白1在慢性鼻竇炎伴鼻息肉中的表達及作用機制.pdf

1、慢性鼻竇炎伴鼻息肉(chronic rhinosinusitis with nasal polyps,CRSwNP)是鼻腔和鼻竇黏膜的慢性炎癥性病變,通常與感染(病毒、細菌、真菌等)、變態(tài)反應和粘液纖毛傳輸功能障礙等多種因素共同作用的結(jié)果。組織形態(tài)學特點表現(xiàn)為上皮細胞損傷,炎性細胞浸潤和上皮下層水腫。廣義而言,炎癥是一種機體對感染和損傷的自我保護機制,而炎性細胞的長期浸潤,且不斷釋放的炎性介質(zhì)和細胞因子(如IL-5、IL-8、TNF-α

2、、IFN-γ和RANTES等)相互作用,促進鼻黏膜局部炎癥反應不斷循環(huán)擴大。
　　近年來,研究發(fā)現(xiàn)新的“晚期炎性因子”高遷移率族蛋白1(High mobility group box 1,HMGB1)在炎癥網(wǎng)絡中的起到關(guān)鍵作用,它可以直接作用于各種炎性細胞(包括中性粒細胞和嗜酸性粒細胞),誘導其釋放多種促炎性或炎性介質(zhì),啟動機體的天然和獲得性免疫過程。已有研究表明,HMGB1在COPD患者的呼吸道上皮細胞中和變應性鼻炎患者的鼻腔分

3、泌物中過表達,但是作用機制尚未被闡述。本研究,我們擬用免疫組化、Western blot、RT-PCR等實驗方法探討HMGB1在CRSwNP中的作用和意義,加深我們對CRSwNP發(fā)病機制的認識,為CRSwNP的治療提供新的實驗和理論依據(jù)。
　　第一部分HMGB1在慢性鼻竇炎伴鼻息肉中的表達及意義
　　目的:研究HMGB1在慢性鼻竇炎伴鼻息肉及正常鼻黏膜中的表達水平,以探討其在鼻息肉形成過程中發(fā)揮的作用。
　　方法:對4

4、1例鼻息肉組織及9例正常鼻黏膜組織分別進行免疫組化、Western blot和RT-PCR法檢測HMGB1、IL-5、IL-8、TNF-α及其mRNA水平。
　　結(jié)果:
　　1.免疫組化顯示HMGB1蛋白在嗜酸性粒細胞性和非嗜酸性粒細胞性鼻息肉均較正常對照組高;
　　2.Western blot顯示HMGB1蛋白水平在嗜酸性粒細胞性鼻息肉明顯高于正常對照組和非嗜酸性粒細胞性鼻息肉(P值分別為0.044,0.001);<

5、br>　　3.HMGB1 mRNA,IL5,IL8和TNF-αmRNA在嗜酸性粒細胞性鼻息肉中表達上調(diào),但在非嗜酸性粒細胞性鼻息肉和正常對照組中相似;
　　4.HMGB1 mRNA與IL5,IL8,TNF-αmRNA存在正相關(guān)性(rs分別為0.665,0.771,0.724;P值均<0.001);
　　5.HMGB1 mRNA與組織浸潤嗜酸性粒細胞和血嗜酸性粒細胞存在較弱的正相關(guān)性(rs分別為0.149,0.225;P值分別

6、為0.012,0.001)。
　　結(jié)論:HMGB1蛋白可能參與了慢性鼻竇炎伴鼻息肉的炎性反應過程,并與不同亞型相關(guān),可作為指導慢性鼻竇炎伴鼻息肉的治療和評價療效的潛在指標。
　　第二部分脂多糖對人鼻黏膜上皮細胞HMGB1表達的影響及意義
　　目的:觀察脂多糖誘導原代培養(yǎng)的鼻黏膜上皮細胞HMGB1蛋白的表達、移位和釋放的影響。
　　方法:以不同濃度的脂多糖(lipopolysaacharides,LPS)作用于原代

7、培養(yǎng)的鼻息肉上皮細胞,檢測其對上皮細胞HMGB1的表達及釋放情況。分別于0、12、24、48、72h用免疫熒光法觀察細胞中HMGB1的定位和移位,WesternBlot檢測細胞中HMGB1蛋白變化趨勢。
　　結(jié)果:與對照組比較,LPS誘導原代培養(yǎng)的鼻息肉上皮細胞24h后,免疫熒光法顯示HMGB1蛋白從胞核向胞漿移位,并隨著刺激時間的延長胞質(zhì)中HMGB1的表達逐漸增加;在時間依賴性實驗中,100μg/ml LPS刺激上皮細胞24h、