知母須根與根莖中差異性成分的分析、分離與鑒定.pdf

1、中藥知母為百合科植物知母(Anemarrhena asphodeloidesBge.)的干燥根莖，為滋陰降火的要藥，具有悠久的臨床用藥歷史。自上世紀(jì)60年代以來，科研工作者對(duì)中藥知母中的化學(xué)成分及其藥理活性進(jìn)行了系統(tǒng)的研究，發(fā)現(xiàn)知母中富含甾體皂苷、黃酮、多糖等多種化學(xué)成分，其中甾體皂苷類成分因其含量較高且藥理活性較好而受到國內(nèi)外學(xué)者的廣泛關(guān)注。按傳統(tǒng)的藥材加工方法，知母根莖上的須根部分需被去除、丟棄，不僅耗時(shí)耗力而且造成了資源的嚴(yán)重浪費(fèi)

2、。為了綜合利用知母藥用植物資源，本文應(yīng)用UPLC/Q-TOF MSe技術(shù)結(jié)合多元統(tǒng)計(jì)學(xué)分析研究知母須根與知母根莖兩者間的差異性成分，并在液質(zhì)指導(dǎo)下對(duì)知母須根中的特異性成分展開有針對(duì)性的分離純化并最終鑒定其結(jié)構(gòu)。
　　1.利用UPLC/Q-TOF MSe技術(shù)對(duì)知母須根與根莖中化學(xué)成分進(jìn)行分析表征，發(fā)現(xiàn)知母須根與根莖中的主要化學(xué)成分具有一致性，且總皂苷的含量處于同一水平；進(jìn)一步應(yīng)用Markerlynx軟件對(duì)知母須根與知母根莖中化學(xué)成分

3、進(jìn)行多元統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，找到兩者之間差異性較大的12個(gè)甾體皂苷類化合物，并利用質(zhì)譜技術(shù)進(jìn)行了在線快速鑒定。
　　2.在液質(zhì)指導(dǎo)下采用SP825大孔吸附樹脂柱層析、M C I樹脂柱層析、R P-C18柱層析、硅膠柱層析、PHPLC等色譜分離方法，對(duì)知母須根中的甾體皂苷進(jìn)行定向分離純化，成功分離得到存在于須根中的7個(gè)差異性成分，總計(jì)分離得到18個(gè)化合物。結(jié)合理化性質(zhì)、高分辨質(zhì)譜、iH-NMR、13C-NMR、1H-1HCOSY、HSQC及

4、HMBC等波譜分析方法，鑒定了18個(gè)化合物的結(jié)構(gòu)，包括12個(gè)呋甾皂苷、5個(gè)螺甾皂苷和1個(gè)木脂素類成分。
　　知母須根中分離鑒定的化合物結(jié)構(gòu)分別為：26-O-β-D-吡喃葡萄糖基-(25R)-5β-呋甾-3β，22α,26-三醇-3-O-β-D-吡喃葡萄糖基-(1→6-β-D-吡喃葡萄糖基-(1→2)-β-D-吡喃半乳糖苷(1)，26-O-β-D-吡喃葡萄糖基-(25S)-5β-呋甾-3β,22α,26-三醇-3-O-β-D-吡喃葡

5、萄糖基-(1→2)-[β-D-吡喃木糖基-(1→3)]-β-D-吡喃葡萄糖基-(1→4)β-D-吡喃半乳糖苷(2)，26-O-β-D-吡喃葡萄糖基-(25S)-5α-呋甾-2α,3β,22α,26-四醇-3-O-β-D-吡喃葡萄糖基-(1→2)-[β-D-吡喃木糖基-(1→3)]-β-D-吡喃葡萄糖基-(1→4)-β-D-吡喃半乳糖苷(3)，(25S)-5α-螺甾-3β,12β-二醇-3-O-β-D-吡喃葡萄糖基-(1→2)-[β-D-

6、吡喃木糖基-(1→3)]-β-D-吡喃葡萄糖基-(1→4)-β-D-吡喃半乳糖苷(4a)、（25R)-5α-螺甾-3β12β-二醇-3-O-β-D-吡喃葡萄糖基-(1→2)-[β-D-吡喃木糖基-(1→3)]-β-D-吡喃葡萄糖基-(1→4)-β-D-吡喃半乳糖(4b)，(25R)-5β-螺甾-3β-羥基-3-O-α-L-吡喃鼠李糖基-(1→2)-β-D-吡喃葡萄糖基-(1→2)-β-D-吡喃葡萄糖苷(5)，TimosaponinN(6

7、)，薤白苷 J(7)，purprueagitosid(8)，Timosaponin E1(9)，知母皂苷BⅡ(10)，25R-知母皂苷BⅡ(11)，Timosaponin I1(12)，UttrosideB(13)， Timosaponin F(C50)(14a)、 F-gitonin(14b)，KarataviosideC(15)，TimosaponinAⅢ(16)，(25S)-5β-螺甾-3β-羥基-3-O-α-L-吡喃鼠李糖基-(

8、1→2)-β-D-吡喃葡萄糖基-(1→2)-β-D-吡喃葡萄糖苷(17)，右旋丁香樹脂酚(18)。其中化合物3、4、5、12、13、14和15為主要存在于知母須根中的7個(gè)差異性成分，1-5為新化合物。
　　本論文應(yīng)用UPLC/Q-TOF MSe技術(shù)結(jié)合多元統(tǒng)計(jì)學(xué)分析方法，建立了快速、有效的比較研究知母須根與知母根莖間化學(xué)成分差異性的分析方法，并在分析基礎(chǔ)上對(duì)主要存在于知母須根中的差異性成分進(jìn)行有針對(duì)性地分離鑒定，闡明了知母須根與根