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文檔簡介
1、目的:本研究采用在不同時期(孕期/哺乳期)給予小鼠高脂飼料喂養(yǎng),通過觀察小鼠妊娠后胎鼠宮內生長情況以及出生后哺乳期生長情況,探討母體在不同時期高脂飲食致子代宮內生長代謝異常以及子代出生后生長代謝異常情況及其潛在的機制。本次研究為預防母體高脂飲食引起的子代生長、發(fā)育異常提供科學的實驗依據。
方法:實驗動物為 ICR雌性小鼠,從8周齡適應性喂養(yǎng)一周后合籠。根據受孕情況將孕鼠隨機分為兩組,每組12只,即普通飲食對照(C)組、高脂飲食
2、(H)組,母鼠分娩后每組再隨機分成兩組(C)組、(H)組,分成四組:CCD,CHD, HCD,HHD。于孕18天,10%水合氯醛(0.3ml/kg)麻醉處死孕鼠,分離出胎鼠和胎盤,測量胎鼠體重、胎盤重量、血清等生化指標;泌乳量從第一天開始每三天測一次,持續(xù)到出生后18天(PND18)。于PND14取各組母鼠乳汁,記錄子代小鼠出生后至PND21體重,于第21天麻醉剖殺小鼠,留取血清、肝臟等樣本,記錄肝臟、腎臟、臟器周圍脂肪重量,測量空腹血
3、糖等指標。采用放射免疫法分析血清胰島素、胰高血糖素,試劑盒測量血清膽固醇、甘油三酯。RT-PCR的方法檢測胎盤、仔鼠肝臟組織中基因的表達水平,采用Western Blot的方法檢測胎盤、肝臟組織中蛋白的表達水平。
結果:孕期末(GD18),高脂組胎盤重量(P=0.004)、仔鼠的血糖水平(P=0.008)、血清總膽固醇水平(P=0.014)顯著高于對照組;血清TG、平均窩重、胰高血糖素水平無統(tǒng)計學差異;血清胰島素水平低于對照組
4、(P=0.058)。高脂組胎盤組織中FATP4基因表達水平顯著上調(P=0.034),FATP4蛋白表達水平有上調趨勢上調,但未出現統(tǒng)計學差異。泌乳量從第六天起CHD、HHD組開始高于CCD組且一直持續(xù)到哺乳期末。在PND14取乳汁測得乳汁成分各組間無統(tǒng)計學差異。雌、雄仔鼠分別從第六天起CHD、HHD組體重開始高于CCD組且一直持續(xù)到哺乳期末,在PND21,雄性仔鼠體重其他三組均顯著高于CCD組,且HHD組最高;雌性仔鼠中,HHD組體重
5、顯著高于其他三組(P<0.05),CHD、HCD組體重高于CCD組(P<0.05)。CHD、HHD組血糖水平雌、雄皆高于CCD組,差異有統(tǒng)計學意義。子代中,雌、雄肝臟重量、臟器周圍脂肪CHD、HHD組重量均高于CCD、HCD組;雄鼠血清TC水平CHD、HHD組均高于CCD、HCD組(P<0.05),雌鼠HHD組顯著高于其他三組(P<0.05);雄鼠血清TG水平HCD組高于CHD組,雌鼠CCD組高于哺乳期高脂組(CHD、HHD),差異有統(tǒng)
6、計學意義。子代雄鼠血清胰島素水平CCD組高于CHD、HCD組,差異有統(tǒng)計學意義,胰高血糖素水平CHD組雌、雄均高于HCD組,差異有統(tǒng)計學意義。在PND21,肝臟病理切片顯示哺乳期高脂組(CHD、HHD)均有不同程度脂肪堆積,哺乳期普通飲食組(CCD, HCD)組未發(fā)現明顯脂肪堆積現象。雄鼠肝臟組織qRT-PCR結果提示:雄鼠CHD組Srebp-1、FATP4、SCD-1較其他三組上調,CCD、HCD、HHD三組間無統(tǒng)計學差異,提示單純哺
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