常溫機(jī)械灌注保存DCD小型豬脂肪肝供肝的實(shí)驗研究.pdf

1、目的：快速有效建立小型豬脂肪肝動物模型；探討應(yīng)用常溫機(jī)械灌注裝置保存對DCD小型豬脂肪肝的保護(hù)、修復(fù)及評估作用。
　　方法研究分為兩部分：第一部分：小型豬脂肪肝模型的建立，選擇巴馬小型豬10只，隨機(jī)分為兩組，對照組5只，模型組5只（1只造模過程中死亡）。對照組常規(guī)基礎(chǔ)飼料喂食；模型組采用綜合配料喂食，綜合配料由基礎(chǔ)飼料（50％）+高脂飼料（豬油50%）+酒精飲料+四環(huán)素組成。其中豬油、酒精飲料通過胃造瘺管進(jìn)行管飼。兩組動物分別在0

2、、2、4、6周末按編號進(jìn)行耳緣靜脈抽血檢測肝臟功能及血脂生化指標(biāo)(包括AST、ALT、GGT、TG、CHO)，并于6周末小切口開腹取肝臟組織進(jìn)行病理檢查。成模標(biāo)準(zhǔn)為肝內(nèi)TG等血脂含量顯著增加，血清ALT等酶學(xué)水平明顯增高，肝組織學(xué)觀察見多灶性炎癥細(xì)胞浸潤及肝細(xì)胞脂肪變性。第二部分：建立脂肪肝豬DCD及熱缺血時間30min動物模型后，切取肝臟約5cm×5cm放入UW液冷藏保存（UW液組），余放入常溫機(jī)械灌注裝置中，與其相應(yīng)管路連接進(jìn)行灌注

3、（NMP組）。分別在灌注前，灌注開始后不同時間點(diǎn)（1h、2h、3h、4h、5h、6h）抽取灌注液進(jìn)行檢驗，檢驗指標(biāo)包括AST、ALT、GGT、TG、CHO；記錄灌注開始后在每小時膽汁引流量；灌注前及灌注開始后2h、4h、6h對兩組分別切取肝組織進(jìn)行病理檢查及肝勻漿質(zhì)檢驗（包括AST、ALT、GGT、TG、CHO）。觀察比較兩組各時間點(diǎn)生化指標(biāo)及肝臟病理組織學(xué)變化。
　　結(jié)果：
　　一、1．一只豬胃造瘺術(shù)后第1天死亡。

4、　　2．模型組和對照組在喂飼期間各生化指標(biāo)比較：在喂飼前（即喂飼0w）、喂飼2w后兩組間 AST、ALT、GGT、TG、CHO、TG值差異均無統(tǒng)計學(xué)意義（P>0.05）；在喂飼4w后兩組間AST、ALT、GGT、TG值差異有顯著統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.001），CHO值差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P=0.056）；在喂飼6w后各兩組間AST、ALT、GGT、TG、CHO、TG值差異均有顯著統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.001）。
　　3．小切口開腹切取肝

5、組織病理檢查對照組肝組織病理：肝小葉結(jié)構(gòu)清晰,肝細(xì)胞索排列正常,核圓、大、居中,無脂滴和炎癥細(xì)胞浸潤,中央靜脈和肝竇內(nèi)有少量血細(xì)胞；模型組（造模6w后）肝組織病理：肝小葉結(jié)構(gòu)模糊，肝細(xì)胞胞漿中有大量大、小脂滴空泡,中央靜脈和肝血竇內(nèi)充血，炎性細(xì)胞浸潤，肝竇受擠壓，間隙變窄。
　　二、1.NMP組不同灌注時間灌注液各生化指標(biāo)比較：灌注2h較開始時 AST、ALT差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05），余時間較開始時差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P>0

6、.05）；GGT灌注過程差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P>0.05）；灌注5h和6h均較開始時CHO、TG差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05）。
　　2.NMP組和 UW液冷保存組及保存終點(diǎn)肝勻漿質(zhì)各生化指標(biāo)比較：經(jīng)6h保存，NMP組肝勻漿質(zhì)酶學(xué)水平較 UW液冷保存組有明顯降低（t，P分別為AST：2.827，0.0311；ALT：3.524，0.0073；GGT：3.010，0.0224），而血脂水平降低無顯著差異（t，P分別為 CHO：2.3

7、15，0.0947；TG：2.620，0.0511）；NMP保存6h肝勻漿質(zhì)ALT、CHO、TG水平較0h明顯降低（P<0.05），AST、GGT差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P>0.05）；UW液冷保存6h肝勻漿質(zhì)GGT水平較0h明顯升高（P<0.05），而AST、ALT、CHO、TG差異均無統(tǒng)計學(xué)意義（P>0.05）。
　　3.不同灌注時間 NMP組膽汁產(chǎn)量變化：開始灌注后2h膽汁引流量約3.5ml/h，且渾濁粘稠；2h-4h膽汁產(chǎn)量最多

8、，維持在約4ml/h，顏色逐漸變清亮；4h-6h膽汁產(chǎn)量明顯下降，約2ml/h，金黃色，清亮。
　　4.不同保存時間UW組和NMP組肝臟組織病理比較：UW組在冷保存6h過程中，肝臟肝竇淤血有所加重，肝臟脂肪變程度無明顯變化；NMP組開始灌注后2h中央靜脈及肝竇廣泛淤血，后逐漸減輕，肝臟脂肪變程度亦逐漸減輕。
　　結(jié)論：1、通過胃造瘺管管飼高脂、酒精飲料及四環(huán)素綜合配料喂飼能夠快速有效建立小型豬脂肪肝動物模型。2、通過 NMP