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文檔簡介
1、冠心病(CHD)是一種嚴重威脅中老年人生命和健康的常見病,多發(fā)病。由于生活習慣和飲食結構的變化,目前更有年輕化的趨勢。長期以來,評估冠心病血管病變嚴重程度主要依賴動脈造影、血管內超聲等影像學手段。然而,血管病變嚴重程度不等同于其功能受損程度,相同病變程度的患者卻常常有著不同的預后差異。依賴影像學評估制定血運重建治療策略僅僅是冠心病治療的一個起點,穩(wěn)定并改善內皮功能才是延長患者生命、提高患者生活質量的關鍵。因此,內皮功能評價的臨床地位越來
2、越重要。
傳統(tǒng)理論認為血管內皮功能的維持依賴循環(huán)內皮祖細胞(EPCs)的動員補充。EPCs的主要來源是骨髓。它具有自我更新、定向分化為內皮細胞的能力。循環(huán)EPCs具有血管受損時動員、歸巢并再內皮化的能力,對血管損傷后的修復過程、血管內環(huán)境穩(wěn)態(tài)維持具有重要意義。因此,計數循環(huán)中EPCs是評估損傷血管內皮修復潛力的重要指標。然而,檢測循環(huán)EPCs數量主要依賴血液流式細胞術,由于易受多種因素的影響,只能間接反映血管內皮功能狀態(tài),因此
3、也未能廣泛應用于臨床。目前,一種新的評估方法,也就是反應性充血外周張力法(PAT)測定外周動脈反應性充血指數(RHI),可無創(chuàng)、自動、數字化定量反映內皮細胞介導的舒張效應,彌補了冠脈造影、肱動脈超聲等評價手段的不足。PAT技術在我國起步相對較晚,目前尚未完全用于臨床檢測。而內皮功能參數RHI與經典指標循環(huán)EPCs數量兩者間的關系尚未見報道,兩者與冠心病血管病變程度分層的相關性亟待探討。為此,本研究對選擇性冠脈造影患者測定其RHI和循環(huán)E
4、PCs數量,并與冠心病危險因素及 SYNTAX評分所反映的冠脈病變分層程度進行分析,以期探討其臨床應用價值。
主要實驗方法:
1.受試對象:本研究以2015年9月至2015年12月在第三軍醫(yī)大學第二附屬醫(yī)院心內科住院患者195例,其中男性117例,年齡范圍平均年齡60歲,女性78例,平均年齡66歲。納入標準:年齡大于18歲通過冠狀動脈造影檢查正常或冠心病患者(男女不限)。按照冠狀動脈造影結果分為正常對照組(66例)和
5、冠心病組(129例)。其中冠心病組又按照心臟外科與介入治療狹窄冠脈研究(SYNTAX)積分法積分,并進一步分為低積分(70例)、中積分(38例)、高積分(21例)三個亞組。病例排除標準為:冠狀動脈支架置入術后、冠狀動脈搭橋術后、半年內有心腦血管意外事件(急性心肌梗死、腦出血、腦栓塞等)、生命體征不穩(wěn)需要ICU治療、惡性腫瘤、嚴重貧血、有包括外周動脈硬化、多發(fā)性動脈炎等血管疾病史、有血管介入治療手術史、對造影劑、麻醉劑過敏、近期使用過硝酸
6、酯類藥物治療以及不同意參與研究的病例。本研究已通過第三軍醫(yī)大學第二附屬醫(yī)院倫理委員會審核,入選病例均已對本研究知曉并簽署知情同意書。
2.采集入組患者基本臨床資料。收集并記錄所有入選病例的臨床信息,姓名、ID號、性別、年齡、身高、體重、血壓、既往疾病史、服藥史、吸煙飲酒史、家族史。入院后第二天抽血空腹靜脈血,檢測血常規(guī)、肝腎功、血脂、血糖;
3.反應性充血外周張力檢測。所有病例在晨起未抽血、未服藥、空腹狀態(tài)下,采用無
7、創(chuàng)反應性充血外周張力檢測儀EndoPAT-2000(Israel)檢測外周動脈內皮功能并測定RHI值。具體方法:受試者取平臥位,休息30分鐘后,雙上肢放松置于軀干兩側,非慣用側上臂佩戴可充氣袖帶,雙手食指各接探測指套,使用配套計算機系統(tǒng)為探測指套充放氣,使其壓力均勻充分作用于食指指端,內置傳感器將指端血管床血流信號傳入計算機,待血流信號穩(wěn)定時即可開始測量。首先將指端血管床血流信號記為基線信號,記錄5分鐘;然后將袖帶充氣200mmHg以上
8、,至指端血流信號消失記為阻斷信號,記錄5分鐘;然后釋放氣袖,指端血流信號恢復,再記錄5分鐘。根據阻斷前后指尖血流信號比,得出反應性充血指數值。根據雙側指尖信號比,控制非內皮依賴性的信號噪音;
4.流式細胞術檢測外周血循環(huán)EPCs數量。所有受試者入院后采集晨起空腹血5 ml,血樣置于肝素鈉抗凝真空管中,室溫保存。實驗前,取200μl血樣置于1.5 ml離心管中,先后加入2μl異硫氰酸熒光素(FITC)標記的抗人CD34抗體(bs
9、-8996R-FITC,北京博奧森)及2μl藻紅蛋白(PE)標記的抗人VEGFR-2抗體(bs-0565R-PE,北京博奧森)雙染色作為實驗組;另取200μl血樣置于離心管中,加入2μlPE標記的同型對照IgG蛋白(bs-0295P-PE,北京博奧森)作為對照組。上述樣本混勻后避光靜置1小時,然后加入800μl紅細胞裂解液(Roche公司)混勻靜置10分鐘,以500×g離心3分鐘,棄上清并使用1 ml細胞洗滌液(天津灝洋)洗滌細胞,再次
10、以500×g離心3分鐘,流式緩沖液500μl重懸細胞,上機(FACS Calibur,BD)檢測計算EPCs在全血單核細胞中的比例;
5.冠狀動脈造影檢查及 SYNTAX積分。采用 Seldinger法穿刺,按以下投照體位(LAO+CRAN、LAO+CAUD、AP+CRAN、AP+CAUD、RAO+CRAN、RAO+CAUD)造影,以血管狹窄大于50%作為標準,采用SYNTAX(Synergy between PCI with
11、 TAXUS and Cardiac Surgury)積分法對多支血管進行積分并分組:<22分為低積分組,23-32分為中積分組,>33分為高積分組;
6.統(tǒng)計學分析。研究數據采用統(tǒng)計軟件SPSS(版本號20.0,IBM公司)處理。冠心病組與對照組組間量值比較采用獨立樣本 t檢驗;不同 SYNTAX積分亞組組內及組間比較采用單因素方差分析(One-way ANOVA);不同因素水平間主效應分析采用雙因素方差分析;頻數采用χ2檢
12、驗,相關性分析采用K-Pearson及Spearman檢驗;繪制受試者工作特征曲線(ROC曲線)并計算曲線下面積(AUC)和約登系數(Youden index)判定RHI、EPCs水平作為檢驗指標衡量冠心病及其危險分度的合理性及其決斷值(cut-off value)。所有參數統(tǒng)計量用均數標準差( x?s)表示,P<0.05表示有統(tǒng)計學意義。
主要實驗結果:
一、基礎資料的比較。對冠心病組及對照組受試者的年齡、體重指數
13、(BMI)、收縮壓、舒張壓、血漿總膽固醇、甘油三酯、低密度脂蛋白、高密度脂蛋白、血漿尿素氮、肌酐、空腹血糖等生理生化指標進行了比較,組間無統(tǒng)計學差異。
二、RHI及循環(huán)EPCs數量與冠心病的相關性分析。與對照組比較,冠心病組RHI降低,循環(huán)EPCs數量減少,兩個指標在兩組間的差異均具有顯著的統(tǒng)計學意義。受試195例中,循環(huán)EPCs數量與動脈RHI正相關,具有統(tǒng)計學意義。
三、RHI及循環(huán)EPCs數量在冠心病SYNTA
14、X積分亞組中的比較??傮w來看,隨著SYNTAX積分的增高,冠心病者中RHI評分逐漸減小,循環(huán)EPCs數量也逐漸降低。SYNTAX積分組間比較,低積分組、中積分組和高積分組存在顯著的統(tǒng)計學差異;組間比較來看,中積分組和高積分組RHI和循環(huán)EPCs數量均較低積分組明顯降低,其差異具有顯著的統(tǒng)計學意義,而中積分組與高積分組之間比較,無論是RHI指數還是循環(huán)EPCs數量均無統(tǒng)計學差異。
四、RHI及循環(huán)EPCs數量與冠心病危險因素的相
15、關性分析。結果發(fā)現:①RHI與受試人群危險因素暴露數量密切相關。RHI在不同暴露數量的情況下分別為:1.78±0.58(0個),1.96±0.73(1個),1.69±0.32(2個)和1.55±0.47(3個以上)。組間比較有顯著統(tǒng)計學差異。其中暴露數2個和3個以上的人群,RHI測值較暴露1個組顯著下降,差異有統(tǒng)計學意義。②進一步地,我們分析了各類危險因素與測量指標的相關性:在總受試人群中,RHI與受試者是否存在糖尿病、高血壓病有顯著的
16、統(tǒng)計學差異,表現為無糖尿病、高血壓病者的RHI較有糖尿病、高血壓病者高;另一方面,循環(huán)EPCs數量則與受試者是否具有高血壓病和吸煙之間存在顯著差異,表現為無高血壓病、吸煙危險因素者較有上述因素者高。其他因素則無顯著統(tǒng)計學意義。③進一步采用了雙因素方差分析,將冠心病組與對照組再次分類統(tǒng)計,分析可能存在的主效應因素。結果發(fā)現;冠心病是影響RHI和EPCs在糖尿病、高血壓、吸煙危險因素之間存在差異的主效應因素,另外,糖尿病也是RHI指標在冠心
17、病組與對照組之間存在統(tǒng)計學差異的主效應因素。而吸煙、飲酒、高血壓等則并不是本試驗中RHI和EPCs在上述因素分組中存在差異的主效應因素。
五、RHI指數與循環(huán)EPCs數量作為冠心病評價指標的效果評價。結果發(fā)現:①RHI和循環(huán)中 EPCs水平均可作為預判是否冠心病的檢查指標(AUCRHI=0.8,AUCEPC=0.781)。本研究中RHI預判冠心病的決斷值為1.685,此時的敏感度為0.719,特異度為0.907;EPCs的陰性
18、預判決斷值為0.045%,此時的敏感度為0.875,特異度為0.705;②RHI可作為冠心病低積分狀態(tài)預判的指標(AUC=0.868)。其中RHI預判低積分狀態(tài)的陽性決斷值為1.425,此時的敏感度為0.857,特異度為0.881;EPCs對低積分狀態(tài)的預判稍差(AUC=0.624),其陽性決斷值為0.0435%,此時的敏感度為0.429,特異度為0.814;③現有數據表明,RHI和循環(huán)EPCs數量尚不能作為中高積分狀態(tài)的預判指標。④R
19、HI與循環(huán) EPCs具有顯著正相關性。聯(lián)合應用RHI與EPCs指標,聯(lián)合ROC曲線AUC=0.889,此時的特異度為0.937,靈敏度為0.682,與單一使用RHI或EPCs指標評估比較,雖靈敏度稍有下降,但評估特異度明顯更優(yōu)。
主要結論:本研究中,無創(chuàng)性 PAT檢查通過檢測指端終末血管床舒張和血流變化的效應定量計算RHI,敏感度較超聲進一步提高;同時通過阻斷/釋放血流對比前后,同步測試對側指端信號,有效提高了信噪比,上述優(yōu)點
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