β-谷甾醇對Hela和耐藥Hela-DDP細胞中miRNAs及靶基因的影響.pdf

1、天然產(chǎn)物β-谷甾醇是植物固醇的一種,其毒副作用小、安全性高、資源豐富,并且具有抗癌作用,已廣泛受到人們的關(guān)注。研究其可能的抑癌機理從而將其更好地應用到腫瘤預防和治療中已成為當前的首要任務。MicroRNAs在腫瘤研究中意義重大,通過控制其表達進而抑制腫瘤的發(fā)生已成為當前的研究熱點。本文通過β-谷甾醇處理Hela細胞和Hela耐藥細胞(Hela/DDP),分析miRNAs和其靶基因的差異表達,進而預測可能的抑癌路徑,尋找癌癥治療前期可能的

2、分子標記,及后期藥物篩選的依據(jù),這對宮頸癌的治療具有重大意義。
　　本研究使用不同濃度(50μmol/L、37.5μmol/L、25μmol/L、12.5μmol/L、6.25μmol/L)的天然產(chǎn)物β-谷甾醇處理Hela細胞和Hela/DDP細胞24h,證實β-谷甾醇對兩種細胞都存在抑制作用,并且發(fā)現(xiàn)藥物對Hela細胞的抑制作用要大于對Hela/DDP細胞的抑制作用。
　　利用microRNAs基因芯片技術(shù)和生物信息學工具

3、對β-谷甾醇處理24h的兩種細胞中744個miRNAs進行高通量篩選及靶標預測,認為hsa-miR-21、hsa-miR-143、hsa-miR-504、hsa-miR-10b可能與癌癥發(fā)生相關(guān),并通過TargetScan數(shù)據(jù)庫及最小自由能分析推測出,PDCD4可能是hsa-miR-21的靶標,RAC3和TP53可能是hsa-miR-504的靶標,TP53是hsa-miR-143的靶標。TIAM1可能是hsa-miR-10b的靶標。

4、r>　　用濃度為25μmol/L的β-谷甾醇處理兩種細胞,并以3h、6h、12h、18h、24h作為時間節(jié)點,通過熒光定量PCR的方法對兩種細胞中藥物處理不同時間的microRNAs和其靶基因進行定量分析。結(jié)果顯示:(1)在Hela細胞中β-谷甾醇藥物處理使得Hsa-miR-21被下調(diào),Hsa-miR-504、Hsa-miR-10b被上調(diào),Hsa-miR-143先上調(diào)后下調(diào);并且使得其靶基因TP53、PDCD4被上調(diào),RAC3被下調(diào),J