URSA模型小鼠脾CD4+Th17-Treg細(xì)胞活化及細(xì)胞因子分泌的研究.pdf

1、目的：檢測(cè)未妊娠小鼠、正常妊娠模型小鼠及URSA模型小鼠脾臟CD4+Th17/Treg細(xì)胞活化水平及 IL-17A、IL-10、IL-21、IL-23細(xì)胞因子分泌的變化。探討CD4+Th17/Treg細(xì)胞及相關(guān)細(xì)胞因子與URSA的關(guān)系，為URSA患者制定免疫防治策略提供基礎(chǔ)資料。
　　方法：建立URSA小鼠模型（♀CBA/J×♂DBA/2J），實(shí)驗(yàn)設(shè)未妊娠小鼠（♀CBA/J）和正常妊娠小鼠模型（♀CBA/J×♂Balb/c）；用免

2、疫磁珠分選技術(shù)（MACS）將三組雌鼠脾臟中的CD4+T細(xì)胞分選出來(lái)，將分選的CD4+T細(xì)胞體外誘導(dǎo)活化為Th17/Treg兩個(gè)細(xì)胞體系，流式細(xì)胞術(shù)（FCM）檢測(cè)兩個(gè)細(xì)胞體系的誘導(dǎo)活化情況；通過(guò)Luminex xMAP技術(shù)檢測(cè)誘導(dǎo)活化后的細(xì)胞培養(yǎng)上清液及蛻膜、胎盤細(xì)胞研磨上清中IL-17A、IL-10、IL-21、IL-23的分泌水平。用Western-Blot檢測(cè)Th17/Treg兩細(xì)胞體系及母-胎界面的蛻膜、胎盤細(xì)胞中IDO、FoxP

3、3蛋白的表達(dá)水平。
　　結(jié)果：（1）FCM檢測(cè)未妊娠小鼠、正常妊娠模型小鼠和URSA模型小鼠脾臟中CD4+T細(xì)胞來(lái)源的Th17細(xì)胞的誘導(dǎo)結(jié)果分別為（0.32±0.19）％、（0.13±0.06）%、（0.72±0.38）%。URSA組Th17細(xì)胞明顯高于未妊娠組和正常妊娠組。三組間兩兩比較差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。三組CD4+CD25+FoxP3+Treg細(xì)胞的誘導(dǎo)結(jié)果分別為（0.38±0.15）%、（0.85±0.48

4、）%、（0.17±0.12）%。URSA組CD4+CD25+FoxP3+Treg細(xì)胞明顯低于未妊娠組和正常妊娠組。三組間兩兩比較差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。
　?。?）Luminex xMAP技術(shù)檢測(cè)小鼠母-胎界面的蛻膜、胎盤細(xì)胞研磨上清中的細(xì)胞因子分泌水平：正常妊娠組IL-17A（9.90±5.04）pg/ml、IL-10（6.50±7.03）pg/ml、IL-23（14.84±11.41）pg/ml和URSA組IL-1

5、7A（14.00±16.73）pg/ml、IL-10（4.10±6.25） pg/ml、IL-23（17.52±16.15）pg/ml。而IL-21細(xì)胞因子分泌水平濃度低于檢測(cè)下限（P>0.05）。三組小鼠誘導(dǎo)后的Th17/Treg細(xì)胞上清中的IL-17A、IL-10、IL-21、IL-23細(xì)胞因子分泌水平的濃度均低于檢測(cè)下限。
　　（3）Western Blot檢測(cè)未妊娠小鼠、正常妊娠模型小鼠和URSA模型小鼠脾臟來(lái)源的CD4+

6、T細(xì)胞誘導(dǎo)后的Th17/Treg細(xì)胞中IDO、FoxP3結(jié)果：URSA組IDO、FoxP3的表達(dá)均明顯低于未妊娠組和正常妊娠組。三組間兩兩比較差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。URSA組小鼠研磨的蛻膜、胎盤細(xì)胞中IDO、FoxP3蛋白表達(dá)均顯著低于正常妊娠組。兩組之間比較差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。
　　結(jié)論：（1）URSA小鼠Th17細(xì)胞的活化分化增殖與URSA的發(fā)生相關(guān)，即Th17細(xì)胞數(shù)量上升不利于妊娠維持；正常妊娠

7、表現(xiàn)為CD4+CD25+FoxP3+Treg細(xì)胞偏移現(xiàn)象，在URSA時(shí)CD4+CD25+FoxP3+Treg細(xì)胞數(shù)量降低則不足以維持妊娠。
　?。?）URSA小鼠脾CD4+T細(xì)胞活化后分泌IL-17A和IL-23與URSA的發(fā)病有關(guān)，且兩者的增加可能誘使URSA發(fā)生；IL-10分泌升高則可維持正常的妊娠。
　?。?）URSA小鼠的蛻膜、胎盤細(xì)胞中IDO、FoxP3蛋白表達(dá)較正常妊娠組均顯著降低，監(jiān)測(cè)URSA患者再孕時(shí)早孕期的