濾泡性淋巴瘤BCL-2-IgH基因重組腺病毒穿梭質(zhì)粒的構(gòu)建與鑒定.pdf

1、目的：構(gòu)建具有感染性的人特異性腫瘤BCL-2/IgH基因的重組腺病毒5型穿梭質(zhì)粒，為制備表達(dá)BCL-2/IgH基因的重組腺病毒奠定基礎(chǔ)。
　　方法： TRIZOL法從DoHH2細(xì)胞中提取總RNA，RT-PCR法獲取BCL-2/IgH融合基因，測(cè)序獲得BCL-2/IgH融合基因序列，經(jīng)過(guò)NCBI blast后，查找Genebank中的BCL-2基因和IgH基因序列號(hào)，結(jié)合上面的測(cè)序結(jié)果，確定包含有BCL-2基因CDS的BCL-2/I

2、gH基因序列，通過(guò)化學(xué)方法全基因合成得到 BCL-2/IgH目的基因，將BCL-2/IgH目的基因裝載到pUC57-Amp質(zhì)粒，雙酶切后與經(jīng)過(guò)同樣處理的5型腺病毒穿梭質(zhì)粒pDC316連接，即構(gòu)建成pDC316-BCL-2/IgH質(zhì)粒；行雙酶切及測(cè)序鑒定。
　　結(jié)果：
　?。?）本實(shí)驗(yàn)提取BCL-2/IgH目的基因，直接核苷酸序列分析t（14；18）連接處PCR產(chǎn)物，結(jié)果顯示DoHH2細(xì)胞株在J6和BCL-2 MBR有一個(gè)j-

3、bcl-2的序列。
　?。?）本實(shí)驗(yàn)成功將BCL-2/IgH目的基因亞克隆到pUC57-Amp通用載體，為進(jìn)一步將外源性目的基因裝載到腺病毒載體做準(zhǔn)備。
　?。?）BCL-2/IgH目的基因成功構(gòu)建入5型腺病毒穿梭質(zhì)粒pDC316中，測(cè)序鑒定與Genebank中的序列一致。
　　結(jié)論：
　　（1）本實(shí)驗(yàn)成功構(gòu)建與鑒定 pDC316-BCL-2/IgH穿梭質(zhì)粒，為下一步制定表達(dá)BCL-2/IGH基因的重組腺病毒奠定