低頻低強度超聲聯(lián)合抗生素對ESBLs大腸桿菌的協(xié)同增效作用研究.pdf

1、目前臨床上診斷和治療生物膜造成的感染是一個很棘手的問題。在歐洲臨床微生物學和傳染病學會2014年年會上發(fā)布了生物膜感染診斷和治療指南，提出超聲聯(lián)合抗生素是一種可能有效治療生物膜感染的方法，亟待進行深入研究。為此，本文研究了低頻低強度超聲聯(lián)合抗生素對ESBLs大腸桿菌生物膜及其懸浮菌的生物學效應和作用機制。
　　目的：
　　探討低頻低強度超聲（Low-frequency and Low-intensity Ultrasound

2、， LFLIU）聯(lián)合抗生素對 ESBLs大腸桿菌生物膜活性、形態(tài)學以及對生物膜抗生素滲透性的影響。探討低頻低強度超聲聯(lián)合抗生素對 ESBLs大腸桿菌懸浮菌活性、形態(tài)學的影響。
　　方法：
　　1．低頻低強度超聲聯(lián)合抗生素類藥物對ESBLs大腸桿菌生物膜的生物學效應的研究
　　將72小時培養(yǎng)出來的生物膜分組，分為對照組（C）、妥布霉素組（T組）、慶大霉素組（Q組）、低頻低強度超聲組（U組）、低頻低強度超聲聯(lián)合妥布霉素組（

3、U+T組）、低頻低強度超聲聯(lián)合慶大霉素組（U+Q），每組3個樣本（n=3），藥物濃度均為200μg/mL。將超聲探頭末端涂抹偶合劑，緊貼于6孔板下端輻照，超聲頻率為42 kHz，強度為0.66 W/cm2，輻照時間為30 min，采取連續(xù)超聲進行輻照。測量實驗前后各組的活性，用掃描電鏡、激光共聚焦顯微鏡觀察生物膜大體形態(tài)改變，建立“三明治”模型，檢測各組生物膜對環(huán)丙沙星滲透性的大小。
　　2.低頻低強度超聲聯(lián)合抗生素類藥物對 ES

4、BLs大腸桿菌懸浮菌的生物學效應研究
　　將處于對數(shù)期的懸浮菌分組，同前，每組3個樣本（n=3），其中藥物濃度為20μg/mL。在37℃恒溫水浴中，用42 kHz，強度為0.66 W/cm2,輻照時間為0.5 h、1 h、1.5 h，采用連續(xù)超聲進行輻照。實驗前后測量每組細菌活性、通透性的改變，用透射電鏡觀察細菌大體形態(tài)。
　　結果：
　　1.生物膜經(jīng)實驗處理后，活性出現(xiàn)了明顯的下降，其中超聲聯(lián)合慶大霉素組與超聲聯(lián)合妥

5、布霉素組分別從(9.200±0.022)log10CFU/cm2下降到了（5.240±0.007) log10CFU/cm2、(3.500±0.020) log10CFU/cm2。掃描電鏡觀察到了生物膜大體形態(tài)改變，并且生物膜內(nèi)大腸桿菌有損傷。激光共聚焦結果分析顯示，生物膜外層細菌活性改變最大，中間層細菌活性改變最小。低頻低強度超聲聯(lián)合抗生素能明顯增強生物膜對環(huán)丙沙星的滲透性。
　　2.細菌生存率隨低頻低強度超聲輻照時間延長出現(xiàn)顯

6、著下降，其中超聲聯(lián)合妥布霉素組生存率下降達（97.73±0.12）％。超聲輻照細菌后，透射電鏡顯示低頻低強度超聲能夠影響菌體結構，從而改變細菌外膜的通透性。PI熒光強度檢測表明細菌死亡率與細菌外膜通透性率成正相關。
　　結論：
　　1.低頻低強度超聲可以清除ESBLs大腸桿菌生物膜，并且對生物膜內(nèi)細菌造成損傷，同時可以提高生物膜對抗生素的滲透性。低頻低強度超聲聯(lián)合抗生素除了產(chǎn)生以上效應外，根據(jù)對不同藥物的敏感性，還可以產(chǎn)生不