褐藻糖膠對多發(fā)性骨髓瘤血管新生的影響.pdf

1、目的：MM活動期患者骨髓中微血管密度較正常人及緩解期患者增高，同時骨髓處于乏癢狀態(tài)導(dǎo)致血管新生更加活躍，從而影響患者的疾病進(jìn)展及預(yù)后。已有研究證實，褐藻糖膠能抑制MM細(xì)胞的增殖，促進(jìn)其凋亡，但對于MM血管新生是否有影響尚未見報道。本研究探討褐藻糖膠在常氧及低氧條件下對MM細(xì)胞誘導(dǎo)血管內(nèi)皮細(xì)胞血管新生的影響及可能的機(jī)制，以及對MM移植瘤小鼠的影響，為MM的治療尋找有效方法。
　　方法：1）收集常氧及低氧條件下經(jīng)不同濃度褐藻糖膠作用后

2、的MM細(xì)胞培養(yǎng)液上清，Elisa法檢測上清中 VEGF含量；2）應(yīng)用收集的上清誘導(dǎo)血管內(nèi)皮細(xì)胞成管，觀察誘導(dǎo)形成小管的能力差異；3）觀察不同組MM細(xì)胞培養(yǎng)液上清對于血管內(nèi)皮細(xì)胞遷移能力的影響；4）收集經(jīng)不同濃度褐藻糖膠處理的MM細(xì)胞，檢測血管新生相關(guān)蛋白的表達(dá)量；5）采用NOD/SCID小鼠建立MM皮下移植瘤模型，造模成功后隨機(jī)分組，予以褐藻糖膠干預(yù)，觀察小鼠成瘤后一般情況及皮下腫瘤生長情況，給藥干預(yù)3周后收集皮下腫瘤；6）切片后常規(guī)H

3、E染色，TUNEL染色檢測病理情況，免疫組化檢測微血管密度以觀察血供情況。
　　結(jié)果：1）在常氧及低氧兩種條件下，使用褐藻糖膠處理骨髓瘤細(xì)胞，培養(yǎng)液上清中VEGF的分泌量均明顯減少（P＜0.05）；2）骨髓瘤細(xì)胞培養(yǎng)液上清誘導(dǎo)血管內(nèi)皮細(xì)胞形成小管數(shù)目與面積隨著褐藻糖膠的濃度升高而減小，100μg/mL時效果顯著（P＜0.05）；3）隨著褐藻糖膠濃度的升高，血管內(nèi)皮細(xì)胞的遷移的數(shù)目逐漸減少；4）在常氧條件下，血管新生血管蛋白 HIF

4、-1α、VEGF、p-AKT、p-ERK1/2的表達(dá)水平隨著褐藻糖膠濃度的升高而降低；低氧條件下，褐藻糖膠對于HIF-1α、VEGF、p-AKT的表達(dá)同樣有抑制作用，但p-ERK1/2表達(dá)量無明顯改變；5）建立MM皮下移植瘤小鼠模型，高濃度褐藻糖膠干預(yù)后，小鼠皮下腫瘤的生長明顯受到抑制，表現(xiàn)為小鼠皮下腫瘤的體積及重量均降低；6）皮下腫瘤細(xì)胞的凋亡率明顯高于未處理組小鼠，經(jīng)過免疫組化分析，高濃度褐藻糖膠組小鼠皮下腫瘤的微血管密度較對照組明