CTP-FoxM1抗原負載的DC疫苗對小鼠FoxM1陽性肝癌皮下模型的免疫治療效應.pdf

1、目的:體外培養(yǎng)Hepa1-6小鼠肝癌細胞株，了解FoxM1作為腫瘤抗原在該細胞株中蛋白的表達水平，探討Hepa1-6細胞用于小鼠FoxM1陽性肝癌皮下模型建立的可能性；摸索Hepa1-6細胞建立C57BL/6小鼠FoxM1陽性皮下肝癌的最佳條件；并探討CTP-FoxM1負載的DC疫苗對小鼠FoxM1陽性皮下肝癌的免疫治療作用。
　　方法:在37℃、5％CO2孵箱中，采用含有10%胎牛血清的DMEM高糖培養(yǎng)基（1%青鏈霉素）培養(yǎng)小鼠

2、肝癌細胞株Hepa1-6，收集對數(shù)生長期Hepa1-6肝癌細胞，RIPA裂解液（強）提取Hepa1-6細胞總蛋白，western blot方法鑒定FoxM1在小鼠肝癌細胞系Hepa1-6中的表達水平。于C57BL/6小鼠右脅腹皮下注射濃度分別5x106/ml、1x107/ml、3x107/ml的 Hepa1-6細胞0.1ml，觀察小鼠皮下腫瘤生長情況并每兩天測量瘤體體積，繪制皮下肝癌的生長曲線，摸索小鼠皮下成瘤的最適條件； HE染色鑒定

3、皮下腫瘤組織，同時Western blot檢測腫瘤組織中FoxM1的表達情況。以濃度為1ug/ml的融合蛋白CTP-FoxM1轉導DC48h制成疫苗，注射于荷瘤小鼠左脅腹皮下，測量并記錄小鼠皮下肝癌瘤體的變化情況，病理檢查確定腫瘤在肺、肝、脾等臟器的轉移情況，ELISA試劑盒檢測小鼠血清中TNF-α、IFN-γ、IL-2的分泌水平，最終評估CTP-FoxM1負載的DC疫苗對小鼠皮下肝癌的免疫治療效應。此外，我們還采用ELISA方法檢測了

4、78例PHC患者血清中CXCL13的表達情況，回顧性分析患者臨床病理特征和實驗室檢查指標并探討CXCL13在肝癌中臨床意義。
　　結果:Hepa1-6小鼠肝癌細胞中高表達FoxM1，可以用來建立FoxM1陽性小鼠皮下肝癌模型。以3x107/ml濃度的Hepa1-6細胞0.1ml荷瘤C57BL/6小鼠，建模時間短、成功率較高，HE染色多見病理性核分裂，腫瘤內微血管豐富，與臨床HCC類似，為觀察后續(xù)DC疫苗在小鼠體內的的抗腫瘤免疫效應

5、奠定了基礎。CTP-FoxM1抗原負載的DC疫苗治療Hepa1-6肝癌細胞荷瘤小鼠，小鼠腫瘤生長受到抑制，且與CTP、FoxM1、PBS負載的DC疫苗對照組相比，皮下瘤體積和腫瘤重量均更小，差異具有統(tǒng)計學意義。CTP-FoxM1組小鼠血清中細胞因子IFN-γ、IL-2的表達量與其他組無統(tǒng)計學差異(P>0.5)，HE病理檢查正常低表達FoxM1的小腸未發(fā)現(xiàn)炎癥以及組織損傷。原發(fā)性肝癌患者血清CXCL13表達水平明顯高于健康人，并且與腫瘤大

6、小、轉移、TNM分期密切相關。
　　結論:Hepa1-6細胞為FoxM1陽性的小鼠肝癌細胞株，可用于FoxM1陽性小鼠皮下肝癌的建立。0.1ml濃度為3x107/ml的Hepa1-6細胞可以在C57BL/6小鼠體內建立穩(wěn)定的皮下移植瘤，為肝癌的治療提供理想的動物模型。CTP-FoxM1抗原負載的DC疫苗對小鼠皮下移植瘤顯示出免疫治療效應，且明顯高于單獨的FoxM1負載的DC疫苗組，說明有CTP負載系統(tǒng)的DC疫苗能更好激活抗腫瘤免疫