大黃素對(duì)人正常肝細(xì)胞LO2株FXR-BSEP通路干預(yù)機(jī)制研究.pdf

1、目的：觀察大黃素（Emodin）對(duì)人正常肝細(xì)胞LO2株中FXR及下游信號(hào)因子BSEP基因、蛋白表達(dá)的影響。
　　方法：培養(yǎng)LO2細(xì)胞，將大黃素按低、中、高（0.02、0.04、0.08μg/ml）三個(gè)劑量對(duì)LO2細(xì)胞進(jìn)行干預(yù)，以熊去氧膽酸（0.1μg/ml）、地塞米松（0.785ng/μl）為陽(yáng)性對(duì)照，通過(guò)RT-PCR和Western-blot法檢測(cè)各個(gè)處理組FXR和BSEP基因的相對(duì)表達(dá)量和蛋白表達(dá)量的變化；使用FXR抑制劑Gu

2、ggulsterones預(yù)先處理LO2細(xì)胞，下調(diào)FXR表達(dá)后，再給予大黃素低、中、高劑量進(jìn)行干預(yù)，以熊去氧膽酸、地塞米松為對(duì)照，通過(guò)RT-PCR和Western-blot法檢測(cè)各個(gè)處理組FXR和BSEP基因的相對(duì)表達(dá)量和蛋白表達(dá)量的變化；使用FXR激動(dòng)劑GW4064預(yù)先處理LO2細(xì)胞，上調(diào)FXR表達(dá)后，再給予大黃素低、中、高劑量進(jìn)行干預(yù)，以熊去氧膽酸、地塞米松為對(duì)照，通過(guò)RT-PCR和Western-blot法檢測(cè)各個(gè)處理組FXR和BS

3、EP基因的相對(duì)表達(dá)量和蛋白表達(dá)量的變化。
　　結(jié)果：
　　1.RT-PCR結(jié)果：和空白對(duì)照組相比，大黃素可以促進(jìn)FXR及BSEP的mRNA表達(dá)；
　　2. Western-blot結(jié)果：在FXR正常表達(dá)的情況下，大黃素低、中、高三個(gè)濃度干預(yù)組的FXR蛋白表達(dá)量高于空白組（P<0.01）；在使用抑制劑Guggulsterones下調(diào)FXR表達(dá)的情況下，與單純給予抑制劑組相比，大黃素中、高劑量組可明顯促進(jìn)FXR蛋白表達(dá)水平

4、（P<0.01），大黃素低、中、高劑量組可明顯促進(jìn)BSEP蛋白表達(dá)水平（P<0.01）；在使用激動(dòng)劑GW4064上調(diào)FXR表達(dá)時(shí)，與單純給予激動(dòng)劑組相比，大黃素高劑量組可明顯促進(jìn)FXR蛋白的表達(dá)（P<0.01）。
　　結(jié)論：大黃素在細(xì)胞水平上，可以對(duì)LO2細(xì)胞中FXR和BSEP的mRNA、蛋白表達(dá)起到一定程度的促進(jìn)作用，具體二者之間是否還存在其他旁路信號(hào)因子的影響，大黃素在機(jī)體之中能否真正起到緩解和治療淤積膽汁的作用還有待于進(jìn)一步