MDR1-P-gp介導(dǎo)的類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎患者甲氨蝶呤耐藥及與中醫(yī)證型相關(guān)性研究.pdf

1、目的:本研究通過(guò)檢測(cè)健康對(duì)照組、類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎(rheumatoid arthritis，RA)甲氨蝶呤(methotrexate，MTX)敏感組及耐藥組患者血液中MTX及代謝產(chǎn)物甲氨蝶呤多聚谷氨酸鹽(methotrexate polyglutamate，MTXPG)的藥物濃度水平的測(cè)定，同時(shí)測(cè)定參與藥物轉(zhuǎn)運(yùn)代謝的相關(guān)蛋白及基因的表達(dá)或功能，如還原性葉酸鹽載體（reduced folate carrier，RFC）、二氫葉酸還原酶(dih

2、ydrofolatereductase，DHFR)、P糖蛋白(P-glycoprotein，P-gp)、多藥耐藥相關(guān)蛋白(multidrugresistance protein，MRP)、mdr1(multidrug resistance1)，以探討耐藥相關(guān)基因與RA患者服用MTX產(chǎn)生耐藥性的可能機(jī)制及與中醫(yī)證型的相關(guān)性，從而為提高RA治療效果、克服MTX耐藥提供新的思路與靶點(diǎn)。
　　方法:將符合納入標(biāo)準(zhǔn)的患者，根據(jù)其病情活動(dòng)度分

3、為MTX敏感組、MTX耐藥組，以流式細(xì)胞儀檢測(cè)外周血淋巴細(xì)胞P-gp蛋白的表達(dá)及功能;以酶聯(lián)免疫法吸附測(cè)定(enzyme linked immunosorbent assay，ELISA)法檢測(cè)紅細(xì)胞內(nèi)MTX藥物濃度;以聚合酶鏈?zhǔn)戏磻?yīng)(PolymeraseChainReaction，PCR)法檢測(cè)外周血MRP、MDR1、RFC、DHFR基因mRNA的表達(dá)，中醫(yī)上將患者分為寒濕阻絡(luò)、濕熱阻絡(luò)、痰瘀痹阻、肝腎虧虛四型，比較各指標(biāo)與中醫(yī)證型是

4、否具有相關(guān)性。并采用SPSS16.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)處理數(shù)據(jù)以分析數(shù)據(jù)間相關(guān)性。
　　結(jié)果:1、外周血單個(gè)核細(xì)胞P-gp的表達(dá)及功能:與正常對(duì)照組相比，MTX敏感組及MTX耐藥組P-gp表達(dá)及功能增高，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05);與MTX敏感組相比，MTX耐藥組P-gp表達(dá)及功能升高，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。2、MTX敏感組平均藥物濃度明顯高于MTX耐藥組平均藥物濃度（t=9.71，P＜0.05雙側(cè)）。3、MTX

5、耐藥組患者M(jìn)PR mRNA表達(dá)量高于MTX敏感組，兩者具有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（t=6.358，P＜0.05雙側(cè)）;MTX耐藥組患者M(jìn)DR1 mRNA表達(dá)量高于MTX敏感組，兩者具有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（t=7.01，P＜0.05雙側(cè));MTX耐藥組患者DHFR mRNA表達(dá)量均值稍高于MTX敏感組，但無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（t=0.28P=0.78＞0.05）;MTX耐藥組患者RFC mRNA表達(dá)量均值低于MTX敏感組，兩者間具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（t=6.12，P＜0.