基于HIF-1通路探討精脒對SW620細胞糖酵解的影響.pdf

1、目的：本研究中以人的結腸癌細胞SW620作為研究對象，采用精脒、DFMO以及2-DG作用于SW620后，綜合觀察它們對SW620細胞糖酵解的影響，并在此基礎上觀察SW620細胞內HIF-1a的表達沉默后精脒能否促進細胞的糖酵解。旨在于明確精脒對SW620細胞糖酵解的影響，并探討其促進糖酵解的作用與HIF-1通路的相關性。
　　方法：（1）用0～75μM不同濃度的精脒作用于細胞，MTT法檢測不同濃度的精脒作用24 h、48 h、72

2、 h后細胞的增殖率。（2）用(0.625、1.25、2.5)μM三種濃度的精脒分別作用于SW620細胞；2.5 mM DFMO分別與三種不同濃度的精脒共同作用于SW620細胞；2.5μM2-DG分別與三種不同濃度的精脒共同作用于SW620細胞，檢測不同組別下SW620細胞糖酵解指標。（3）用連二亞硫酸鈉處理SW620細胞導致細胞缺氧，再用(0、0.625、1.25、2.5)μM三種濃度的精脒分別作用于缺氧條件下的SW620細胞，檢測在不

3、同濃度精脒作用下，SW620細胞糖酵解指標。（4）選取有效的HIF-1α-siRNA片段對SW620細胞進行瞬時轉染，運用real-time PCR技術檢驗siRNA轉染的有效性；然后再用(0.625、1.25、2.5)μM三種濃度的精脒分別作用于HIF-1α表達被干擾的SW620細胞，檢測在不同濃度精脒作用下，SW620細胞糖酵解指標。
　　結果：（1）通過觀察細胞增殖率折現(xiàn)圖顯示，我們發(fā)現(xiàn)精脒為0.625、1.25、2.5μM

4、三種濃度時，對細胞促增殖作用最為明顯，且藥物作用24 h后這三種濃度精脒的促增殖作用呈現(xiàn)明顯的上升趨勢。（2）加入精脒后，總體來看SW620細胞的葡萄糖消耗增多，乳酸產量升高，LDH活性增強，ATP水平提高，Glut1、LDHA以及HIF-1α的蛋白水平明顯升高。而DFMO以及2-DG使細胞的這些糖酵解指標降低。（3）缺氧導致細胞糖酵解水平升高，缺氧條件下加入精脒可以進一步提高細胞的糖酵解水平。（4）HIF-1αsiRNA瞬時轉染細胞株