植物內(nèi)生真菌抗腫瘤活性物質(zhì)的研究.pdf

1、廈門大學博士學位論文植物內(nèi)生真菌抗腫瘤活性物質(zhì)的研究姓名：王建鋒申請學位級別：博士專業(yè)：動物學指導教師：蘇文金2001.8.2E建鋒博士論文摘要很強的細胞毒作用，將其發(fā)酵液用乙酸乙酯抽提濃縮后，用甲醇、丙酮等溶劑反復重結(jié)晶，即可得到無色純凈的柱狀晶體。采用XRay單晶衍射、IR以及NMR等手段確定了該晶體的是一種大環(huán)內(nèi)酯類物質(zhì)一一布雷菲德菌素A(BrefeldinA，BFA)。本文工作證實了南方紅豆杉、香榧和三尖杉中存在著豐富的植物內(nèi)生

2、真菌資源，種屬多樣?？鼓[瘤活性菌株WTF5除了產(chǎn)生紫杉醇外，還可產(chǎn)生CytD，經(jīng)鑒定為一種瘤座孢(Tuberculariasp)，這是首次從紅豆杉類植物中分離到瘤座孢屬真菌，是一株紫杉醇和松胞菌素新的產(chǎn)生菌。H036可產(chǎn)生BFA(產(chǎn)量≥100mg／L發(fā)酵液)，經(jīng)鑒定為一種擬青霉(Paecilomycessp)，是一株布雷菲德菌素新的產(chǎn)生菌。這些結(jié)果表明藥用植物內(nèi)生真菌是研究和開發(fā)抗腫瘤微生物藥物的寶貴資源。本文還對分離到的CytD和BF

3、A對腫瘤細胞的作用作了初步的探討。采用MTT和貼壁集落等方法檢測了CytD和BFA對HL60、KB等腫瘤細胞的抑制作用，并采用流式細胞檢測法和激光共聚焦掃描形態(tài)觀察法研究了CytD和BFA誘導細胞凋亡的作用。結(jié)果表明，CytD對HL60、KB、Hela、MCF7和SpcA一1細胞的ICso分別為250、250、250、500、100ng／ml；BFA的細胞毒作用要比CytD強，對這些細胞的IC50分別為15、10、30、25、20ng／

4、ml。CytD能夠誘導HL60和KB細胞G2／M期阻滯和細胞凋亡；經(jīng)CytD處理的KB細胞在6h內(nèi)就出現(xiàn)起泡現(xiàn)象(Cellblebbing)，在24h后G2，M期阻滯到達最高峰(18％上升到40％)，48h后Bcl2的表達明顯下降，大量細胞凋亡(48％上升到55％)。提示微絲系統(tǒng)對細胞信號的傳導具有重要作用，對微絲的破壞，可能會誘導細胞凋亡。BFA能夠誘導HL60及KB細胞的G0，G1期阻滯和細胞凋亡。BFA處理KB細胞24h后，細胞不