延胡索生物堿譜-效關(guān)系及相互作用研究.pdf

1、延胡索俗稱元胡，是著名的“浙八味”之一，始載于《本草拾遺》，中國(guó)藥典收載其正品來(lái)源為罌粟科(Papaveraeeae)紫堇屬（Corydalis）植物延胡索（Corydalisyanhusuo W.T.Wang）的干燥塊莖，是中醫(yī)藥學(xué)中傳統(tǒng)的活血、行氣、止痛藥，應(yīng)用歷史悠久，在中樞神經(jīng)系統(tǒng)、心血管系統(tǒng)等多方面具有顯著作用。
　　到目前為止，對(duì)延胡索的研究多局限于延胡索乙素或其衍生物等叔胺堿的研究，對(duì)季銨堿成分的研究尚少報(bào)道，更未見

2、不同類型生物堿與其功效的相關(guān)性以及相互作用研究。因此，本論文以季銨堿的抗心肌缺血活性為重點(diǎn)研究譜效關(guān)系。
　　本論文應(yīng)用高效液相色譜技術(shù)，對(duì)40種不同產(chǎn)地的延胡索藥材進(jìn)行指紋圖譜分析，并運(yùn)用國(guó)家藥典相似度分析軟件對(duì)HPLC指紋圖譜進(jìn)行相似度分析，初步找出十個(gè)共有峰，還運(yùn)用多種純化分離方法和結(jié)構(gòu)鑒定技術(shù)(大孔樹脂、硅膠、MCI、UV、MS、1HNMR、13CNMR)對(duì)共有峰化學(xué)成分進(jìn)行系統(tǒng)研究，從中分離得到6個(gè)化合物，分別為13-甲

3、基巴馬土賓、13-甲基脫氫紫堇達(dá)明堿、脫氫延胡索堿、脫氫紫堇鱗莖堿、黃連堿和非洲防己堿。
　　UPLC是近年來(lái)才興起的一種具有優(yōu)越的靈敏度和分離能力的分離檢測(cè)技術(shù)。本論文通過優(yōu)化液相分析條件，建立了延胡索不同類型生物堿的UPLC特征指紋圖譜，定量了37個(gè)樣品的共有峰峰面積，并對(duì)指紋圖譜進(jìn)行了聚類分析和相似度分析。結(jié)果表明，不同產(chǎn)地的延胡索質(zhì)量差別比較大，其中以37號(hào)樣品（產(chǎn)地浙江，購(gòu)自北京同仁堂）為參照，發(fā)現(xiàn)產(chǎn)地浙江、四川、湖南的

4、醋制延胡索與其相似度較高，可以聚為一類，而陜西和山東的生品與其差距最遠(yuǎn)。
　　應(yīng)用UPLC-Q-TOF技術(shù)，在線快速指認(rèn)和鑒定了原小檗堿型季銨堿共有峰的化學(xué)成分。
　　本論文通過MTT法，比較了37種不同產(chǎn)地的延胡索季銨堿對(duì)H9C2心肌細(xì)胞缺氧/復(fù)氧損傷的保護(hù)作用，得到譜效關(guān)系研究的藥效學(xué)評(píng)價(jià)指標(biāo)。
　　還應(yīng)用多元回歸分析，灰關(guān)聯(lián)度分析和相關(guān)分析等化學(xué)計(jì)量學(xué)方法對(duì)37種不同產(chǎn)地的延胡索季銨堿的化學(xué)指紋信息和藥效學(xué)指標(biāo)進(jìn)

5、行了譜效關(guān)系研究。結(jié)果表明，4號(hào)峰脫氫紫堇鱗莖堿對(duì)藥效貢獻(xiàn)最大，是延胡索季銨堿中重要的活性物質(zhì);3號(hào)峰13-甲基脫氫紫堇達(dá)明堿、1號(hào)峰非洲防己堿、2號(hào)峰黃連堿、8號(hào)峰脫氫延胡索堿和6號(hào)峰巴馬汀對(duì)藥效也都有正向貢獻(xiàn)作用;而5號(hào)峰13-甲基巴馬土賓和7號(hào)峰小檗堿與藥效相關(guān)性很低或者負(fù)相關(guān)，提示X4、X3、X1、X2、X8和X6共同構(gòu)成了延胡索季銨堿抗心肌缺血的藥效物質(zhì)成分群。本研究為中藥“譜效關(guān)系”的質(zhì)控模式提供了理論依據(jù)和實(shí)踐探索。

6、>　　本論文通過測(cè)MTT對(duì)延胡索季銨堿共有峰單體化合物進(jìn)行了藥效學(xué)評(píng)價(jià)，并計(jì)算出8個(gè)化合物的EC50。結(jié)果表明，黃連堿、脫氫延胡索堿和非洲防己堿對(duì)于心肌細(xì)胞缺氧/復(fù)氧模擬的心肌缺血/再灌注損傷模型的藥效活性最好，是延胡索季銨堿的重要活性物質(zhì);脫氫紫堇鱗莖堿，13-甲基脫氫紫堇達(dá)明堿以及巴馬汀也都有顯著的保護(hù)作用;而13-甲基巴馬土賓和小檗堿沒有明顯的心肌細(xì)胞缺氧/復(fù)氧保護(hù)作用它們6種物質(zhì)共同組成了延胡索季銨堿抗心肌缺血的藥效物質(zhì)基礎(chǔ)。。

7、這與多元回歸分析，灰關(guān)聯(lián)度分析和person相關(guān)分析的結(jié)果是基本一致的。因此，單體給藥很好的驗(yàn)證了譜效分析方法的可靠性和準(zhǔn)確性。
　　本論文通過小鼠熱板法和扭體法對(duì)延胡索叔胺堿和季銨堿以及兩者1∶1配伍給藥的鎮(zhèn)痛作用進(jìn)行了比較。結(jié)果表明，對(duì)于熱傳導(dǎo)引起的中樞疼痛，叔胺堿有明顯鎮(zhèn)痛作用，季銨堿和混合組都沒有明顯中樞鎮(zhèn)痛作用。對(duì)于腹腔注射醋酸導(dǎo)致的外周疼痛，季銨堿有明顯鎮(zhèn)痛作用，叔胺堿無(wú)明顯鎮(zhèn)痛作用，且兩者混合后，對(duì)季銨堿的鎮(zhèn)痛作用沒