川芎嗪對(duì)脂多糖誘導(dǎo)急性呼吸窘迫綜合征水通道蛋白1、5表達(dá)影響的研究.pdf

1、目的：
　　水通道蛋白是一組與液體平衡有關(guān)的細(xì)胞膜轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白，大量證據(jù)表明AQPs與ARDS肺水的代謝和轉(zhuǎn)運(yùn)密切相關(guān)，其中AQP1和AQP5對(duì)維持肺內(nèi)外液體平衡共同發(fā)揮著重要作用。川芎嗪的有效成分是TMP，研究業(yè)已證實(shí)其具有緩解肺水腫的藥理作用，但TMP對(duì)肺水腫的改善作用是否與水通道蛋白1、5密切相關(guān)，目前尚不清楚。為了證實(shí)這一假設(shè)，我們通過(guò)細(xì)胞和動(dòng)物兩個(gè)層面，構(gòu)建 ARDS的體外和體內(nèi)模型，觀察川芎嗪對(duì)急性呼吸窘迫綜合征非心源性肺

2、水腫的影響，并探討水通道蛋白1、5表達(dá)的調(diào)節(jié)是否為其作用的可能靶點(diǎn)之一。
　　方法：
　　構(gòu)建ARDS的體外和體內(nèi)模型，將A549細(xì)胞和SD大鼠隨機(jī)分為正常對(duì)照組（N組）、TMP處理組(T組)、LPS刺激組(L組)、TMP治療組(LT組)。MTT法檢測(cè)細(xì)胞體外增殖，實(shí)時(shí)定量PCR技術(shù)（RT-qPCR）檢測(cè)各組細(xì)胞AQP1、AQP5mRNA水平。通過(guò)觀察大鼠的一般情況及動(dòng)脈血?dú)夥治鲎C實(shí)造模是否成功，肺組織病理學(xué)改變和濕/干重比

3、驗(yàn)證肺水腫變化，RT-qPCR檢測(cè)各組大鼠肺組織AQP1和AQP5mRNA水平，免疫組化和免疫印跡技術(shù)(Western blot)檢測(cè)AQP1、AQP5蛋白表達(dá)。
　　結(jié)果：
　　經(jīng)MTT法檢測(cè)LPS和TMP對(duì)A549細(xì)胞增殖的影響后,確定LPS的最佳作用濃度為5-10mg/L、TMP的安全范圍為10-50mg/L。觀察大鼠一般情況及動(dòng)脈血?dú)夥治鼋Y(jié)果證實(shí)尾靜脈注射10mg/kg LPS復(fù)制ARDS模型成功，通過(guò)肺組織病理改變

4、和濕/干重比觀察到TMP處理組肺水腫緩解。RT-qPCR檢測(cè)各組細(xì)胞和大鼠肺組織AQP1、AQP5mRNA結(jié)果顯示TMP處理組AQP1和AQP5mRNA水平高于對(duì)照組(P＜0.05)；而LPS刺激組兩者水平降低(P＜0.05)；同時(shí)，與LPS刺激組相比，TMP治療組AQP1、AQP5轉(zhuǎn)錄水平上升，但低于N、T兩組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。免疫組化和Western blot檢測(cè)各組大鼠肺組織AQP1、AQP5蛋白表達(dá)情況與mRN